【摘 要】
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目的：构建人Ism1基因真核表达载体,并验证其在真核细胞中的表达,为相关研究奠定基础。方法：采用高保真DNA聚合酶和GC缓冲液从A549细胞扩增获取人Ism1编码序列全长,经酶切、连接
【机 构】
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广东省医学分子诊断重点实验室,广东医学院衰老研究所,广东医学院生物化学与分子生物学研究所
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目的：构建人Ism1基因真核表达载体,并验证其在真核细胞中的表达,为相关研究奠定基础。方法：采用高保真DNA聚合酶和GC缓冲液从A549细胞扩增获取人Ism1编码序列全长,经酶切、连接、转化后,挑取阳性克隆进行菌液PCR、双酶切,及测序鉴定;用构建成功的Ism1表达载体转染293T细胞,用实时定量RT-PCR检测Ism1表达水平。结果：构建的Ism1载体经菌液PCR,双酶切鉴定后,测序结果完全正确,载体转入293T细胞后,Ism1表达量显著上升。结论：成功构建能在真核细胞中表达的人Ism1基因载体,将为相
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