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番茄斑萎病毒 （Ｔｏｍａｔｏｓｐｏｔｔｅｄｗｉｌｔｖｉｒｕｓ，ＴＳＷＶ）寄主广泛，危害多种作物，近年发现侵染烟草引起严重经济损失。研究该病毒的分子检测方法，对健康烟草种苗培育和指导病害防控具有重要意义。本文根据ＴＳＷＶ核壳体蛋白基因 （Ｎ基因）序列设计引物，用 ＲＴＰＣＲ方法对采于云南疑似番茄斑萎病毒症状的５个烟草病害标样 （１０２，５１４，自 １０，自 １６，自 ５８）进行检测，ＰＣＲ产物连接 ｐＭＤ载体并测序。测序结果表明：这 ５种烟草病害分离物与已报道 ＴＳＷＶＮ基因核酸序列相似性大于 ９７.０４