【摘 要】
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目的 探讨大叶冬青叶中三萜类活性成分27-P-香豆酰基-乌索酸(27-P-CAUA)对乳腺癌细胞增殖抑制的作用机制.方法 27-P-CAUA处理HCC-1806细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测HCC-1806细胞存活率;集落克隆法检测27-P-CAUA对细胞的增殖抑制作用;JC-1检测线粒体膜电位改变;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞免疫荧光观察C-Caspase-3、P62表达;氯喹预处理后,Western blot观察27-P-CAUA对LC3I/II、P62以及HER2信号通路蛋白的影响
【机 构】
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皖南医学院药学院,安徽 芜湖 241002
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目的 探讨大叶冬青叶中三萜类活性成分27-P-香豆酰基-乌索酸(27-P-CAUA)对乳腺癌细胞增殖抑制的作用机制.方法 27-P-CAUA处理HCC-1806细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测HCC-1806细胞存活率;集落克隆法检测27-P-CAUA对细胞的增殖抑制作用;JC-1检测线粒体膜电位改变;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞免疫荧光观察C-Caspase-3、P62表达;氯喹预处理后,Western blot观察27-P-CAUA对LC3I/II、P62以及HER2信号通路蛋白的影响.结果 CCK-8和集落克隆结果显示,随着药物浓度增加和时间延长,27-P-CAUA对HCC-1806乳腺癌细胞的抑制作用逐渐增强(P<0.01),24、48、72 h的IC50值分别为83.671、49.479、19.578μmol/L;JC-1检测结果显示,线粒体膜电位改变明显(P<0.01);流式细胞术结果显示,27-P-CAUA可诱导细胞发生凋亡,细胞早期调亡比率增加3.34％;免疫荧光结果显示,C-Caspase-3表达增强,促进细胞凋亡,40μmol/L 27-P-CAUA能显著诱导细胞凋亡(P<0.01).Western blot和细胞免疫荧光结果显示,27-P-CAUA降低LC3II表达,导致P62降解,诱导自噬发生.经氯喹预处理后,27-P-CAUA诱导自噬可被逆转.此外,27-P-CAUA可抑制细胞内Her2及AKT蛋白的磷酸化,细胞内的Her2以及磷酸化AKT蛋白表达逐渐减少(P<0.01).结论 27-P-CAUA可通过抑制HER2/PI3K/AKT信号通路,抑制HCC-1806细胞增殖,诱导细胞发生线粒体自噬和凋亡.
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