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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定更昔洛韦的含量。方法：采用ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μm）的色谱柱，流动相为甲醇-水（10：90，V/V）。检测波长：254nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min。结果：本方法测定的线性范围0.20μg /ml-20μg /ml，r=0.99976，更昔洛韦的加标回收率为90%-100%，最低检出限为0.045μg/ml（S/N=3）。结论：本方法简单，灵敏，重现性好，结果准确，适合更昔洛韦的含量检测。
关键词：高效液相色谱法 更昔洛韦 含量测定
更昔洛韦（gancidovir，GCL）是继阿昔洛韦之后开发的一种新型核苷类抗病毒药物，主要针对巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘疱疹病毒和EB病毒，其中对于抗人体巨细胞病毒感染，它是第一个能能够有效的治疗此病毒感染的药物。尤其对艾滋病患者CMV感染具有很强的抗病毒作用。更昔洛韦与阿昔洛韦有着相似的化学结构，经人体吸收后可代谢转化为三磷酸GCV，此物质可以通过竞争抑制三磷酸脱氧鸟苷结合到延伸的病毒DNA中，从而达到抗病毒的作用。在本文中，笔者采用HPLC法测定更昔洛韦的含量。现报道如下。
一、仪器和试剂
1.仪器。Aglient 1260高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、紫外可见波长检测器）（安捷伦公司），德国IKA Vortex 3涡旋混合器，Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），分析天平（精度为万分之一）。
2.试剂。更昔洛韦标准品（中国药品生物制品检定所）、更昔洛韦原料、甲醇（色谱纯）、水为超纯水、氢氧化钠（分析纯）、盐酸（分析纯）、过氧化氢（分析纯）。
二、实验方法和结果
1.色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μm），流动相为甲醇-水（10：90，V/V），检测波长：254nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min。
2.标准溶液的配置。标准储备液。精密称取更昔洛韦标准对照品（纯度≥98%，HPLC级）0.0100g于10mL容量瓶中，加入少量流动相，摇匀，充分溶解后，再加流动相定容至刻度，使最终浓度为1mg/mL的标准储备溶液，4℃冰箱冷藏保存备用。
2.1标准工作液。用移液器吸取1000μl的2.2.1中更昔洛韦标准储备溶液于50ml的容量瓶中，用流动相定容至刻度，使最终浓度为20.00μg/ml的标准溶液。再用流动相向下稀释使其浓度（μg/ml）分别为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00的标准工作溶液。
3.破坏性试验。精密称取更昔洛韦原料12.5mg，置于25 ml 容量瓶中，分别加0.1 mol/L HCL溶液、0.1 mol/L NaOH溶液、30 %H2O2溶液各2 ml ，恒温水浴加热1 h，室温冷却后，分别加入0.1 mol/L HCL溶液、0.1 mol/L NaOH溶液 2 ml 进行中和，加水稀释至刻度，混合均匀，过滤，取滤液10μl进样，记录色谱图。
4.线性范围。在“2.1”色谱条件下，将“2.2.2”中的配置好的标准工作溶液依次从低浓度到高浓度进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，所得的峰面积为纵坐标，用Agilent色谱工作站自动校正，得到直线的回归方程，即为标准曲线。实验测得更昔洛韦在0.20μg/ml-20μg/ml的浓度范围内，其线性回归方程分别为A=38723C-337.86（r=0.99976），结果均表明线性良好。
5.色谱图。在“2.1”色谱条件下，更昔洛韦在4.5min左右出峰，样品中其他杂质对目标峰无干扰，分离良好。结果见图2-1，2-2，2-3。
6.精密度试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比辅料稀释定容，最终得到含GCL 0.20μg/ml、10μg/ml及20μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1项色谱条件下，获得色谱图，外标法读取GCL的浓度。在同一天内和不同天内（n=5）分别考察该实验方法的精密度和重复性。结果显示RSD%均小于10%，符合要求。见表1。
7.方法回收率试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比輔料稀释定容，最终得到含GCL 0.20μg/ml、10μg/ml及20μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1”项色谱条件下，获得色谱图，每个浓度平行测得6次，外标法读取GCL的浓度。以测得的量与加入量的百分比作为回收率的值。结果加标回收率为90%-100%，见表2。
8.检出限试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比辅料稀释定容，最终得到含GCL 0.035μg/ml、0.045μg/ml及0.050μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1”项色谱条件下，获得色谱图，我们以S/N=3计，得到更昔洛韦在本方法中的检出限为0.045μg/ml。
三、结语
本研究中建立的高效液相色谱法测定更昔洛韦的含量，是在参考相关文献在研究中，先后采用甲醇-水40：60、30：70、20：80，分离效果均不理想，最后采用10：90和5：95，得到了较好的分离，其中，10：90相比较更为理想。因此，本研究采用甲醇-水（10：90）作为流动相。本方法操作简单，快速，准确，灵敏。研究中采用的色谱条件不仅可以用于更昔洛韦原料的含量测定，还可用于更昔洛韦注射剂、凝胶剂质量控制，临床血药浓度监测等等，值得推广使用。
参考文献：
[1]傅绍军，朱利民，洪枫.抗巨细胞病毒药物一GCL[J].国外医药抗生素分册，2004， 25（6）： 282-286.
[2]龙星宇，邓茂，陈福南.人体尿液中阿昔洛韦和更昔洛韦的反相高效液相色谱法同时测定[J]. 贵州师范大学学报（ 自然科学版），2013，31（6）：73-76.
关键词：高效液相色谱法 更昔洛韦 含量测定
更昔洛韦（gancidovir，GCL）是继阿昔洛韦之后开发的一种新型核苷类抗病毒药物，主要针对巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘疱疹病毒和EB病毒，其中对于抗人体巨细胞病毒感染，它是第一个能能够有效的治疗此病毒感染的药物。尤其对艾滋病患者CMV感染具有很强的抗病毒作用。更昔洛韦与阿昔洛韦有着相似的化学结构，经人体吸收后可代谢转化为三磷酸GCV，此物质可以通过竞争抑制三磷酸脱氧鸟苷结合到延伸的病毒DNA中，从而达到抗病毒的作用。在本文中，笔者采用HPLC法测定更昔洛韦的含量。现报道如下。
一、仪器和试剂
1.仪器。Aglient 1260高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、紫外可见波长检测器）（安捷伦公司），德国IKA Vortex 3涡旋混合器，Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），分析天平（精度为万分之一）。
2.试剂。更昔洛韦标准品（中国药品生物制品检定所）、更昔洛韦原料、甲醇（色谱纯）、水为超纯水、氢氧化钠（分析纯）、盐酸（分析纯）、过氧化氢（分析纯）。
二、实验方法和结果
1.色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μm），流动相为甲醇-水（10：90，V/V），检测波长：254nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min。
2.标准溶液的配置。标准储备液。精密称取更昔洛韦标准对照品（纯度≥98%，HPLC级）0.0100g于10mL容量瓶中，加入少量流动相，摇匀，充分溶解后，再加流动相定容至刻度，使最终浓度为1mg/mL的标准储备溶液，4℃冰箱冷藏保存备用。
2.1标准工作液。用移液器吸取1000μl的2.2.1中更昔洛韦标准储备溶液于50ml的容量瓶中，用流动相定容至刻度，使最终浓度为20.00μg/ml的标准溶液。再用流动相向下稀释使其浓度（μg/ml）分别为0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00的标准工作溶液。
3.破坏性试验。精密称取更昔洛韦原料12.5mg，置于25 ml 容量瓶中，分别加0.1 mol/L HCL溶液、0.1 mol/L NaOH溶液、30 %H2O2溶液各2 ml ，恒温水浴加热1 h，室温冷却后，分别加入0.1 mol/L HCL溶液、0.1 mol/L NaOH溶液 2 ml 进行中和，加水稀释至刻度，混合均匀，过滤，取滤液10μl进样，记录色谱图。
4.线性范围。在“2.1”色谱条件下，将“2.2.2”中的配置好的标准工作溶液依次从低浓度到高浓度进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，所得的峰面积为纵坐标，用Agilent色谱工作站自动校正，得到直线的回归方程，即为标准曲线。实验测得更昔洛韦在0.20μg/ml-20μg/ml的浓度范围内，其线性回归方程分别为A=38723C-337.86（r=0.99976），结果均表明线性良好。
5.色谱图。在“2.1”色谱条件下，更昔洛韦在4.5min左右出峰，样品中其他杂质对目标峰无干扰，分离良好。结果见图2-1，2-2，2-3。
6.精密度试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比辅料稀释定容，最终得到含GCL 0.20μg/ml、10μg/ml及20μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1项色谱条件下，获得色谱图，外标法读取GCL的浓度。在同一天内和不同天内（n=5）分别考察该实验方法的精密度和重复性。结果显示RSD%均小于10%，符合要求。见表1。
7.方法回收率试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比輔料稀释定容，最终得到含GCL 0.20μg/ml、10μg/ml及20μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1”项色谱条件下，获得色谱图，每个浓度平行测得6次，外标法读取GCL的浓度。以测得的量与加入量的百分比作为回收率的值。结果加标回收率为90%-100%，见表2。
8.检出限试验。精密吸取标准储备溶液适量于10mL容量瓶中，用甲醇和等比辅料稀释定容，最终得到含GCL 0.035μg/ml、0.045μg/ml及0.050μg/ml混合溶液，依法操作，在“2.1”项色谱条件下，获得色谱图，我们以S/N=3计，得到更昔洛韦在本方法中的检出限为0.045μg/ml。
三、结语
本研究中建立的高效液相色谱法测定更昔洛韦的含量，是在参考相关文献在研究中，先后采用甲醇-水40：60、30：70、20：80，分离效果均不理想，最后采用10：90和5：95，得到了较好的分离，其中，10：90相比较更为理想。因此，本研究采用甲醇-水（10：90）作为流动相。本方法操作简单，快速，准确，灵敏。研究中采用的色谱条件不仅可以用于更昔洛韦原料的含量测定，还可用于更昔洛韦注射剂、凝胶剂质量控制，临床血药浓度监测等等，值得推广使用。
参考文献：
[1]傅绍军，朱利民，洪枫.抗巨细胞病毒药物一GCL[J].国外医药抗生素分册，2004， 25（6）： 282-286.
[2]龙星宇，邓茂，陈福南.人体尿液中阿昔洛韦和更昔洛韦的反相高效液相色谱法同时测定[J]. 贵州师范大学学报（ 自然科学版），2013，31（6）：73-76.