【摘 要】
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为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D（glycoprotein D,gD）和多克隆抗体，试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列，设计了特异性引物，使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导并优化表达，
【基金项目】
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山东省驴产业技术体系项目（SDAIT-27-11）； 山东省驴产业科技协同创新中心开放课题（319330802）； 聊城大学理工科研项目（318011701）；
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为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D（glycoprotein D,gD）和多克隆抗体，试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列，设计了特异性引物，使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导并优化表达，获得gD重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定表达产物。使用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化gD重组蛋白，并免疫小鼠，共免疫3次，每次间隔2周。三免2周后，通过Western-blot对鼠抗EHV-8 gD多克隆抗体进行鉴定，并使用间接ELISA测定其效价。结果表明：试验成功构建EHV-8 gD960基因表达载体并获得gD重组蛋白，gD重组蛋白分子质量约为65 ku,与预期大小相符，且特异性良好。小鼠血清中鼠抗EHV-8 gD960多克隆抗体效价为1∶16 000,该多克隆抗体可以与EHV-8 gD960蛋白发生免疫反应。说明成功表达了EHV-8 gD960重组蛋白并制备了多克隆抗体，多克隆抗体的效价较高，免疫原性较好。
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