【摘 要】
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目的 建立简易的RHD合子型直接测定方法.方法根据RHD基因序列和RHD基因缺失的原理设计两对引物,分别特异性针对RHD基因第一外显子和融合Rh盒子,再引入一对内对照引物,建立新的双管复式PCR方法;并用于检测152份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本、以及359份已知Rh表型样本的RHD合子型.检测结果与使用近期报道的限制性片段长度多态性(RFLP)技术的鉴定结果相比较.结果 152份已知R
【机 构】
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518035,深圳市输血医学研究所,518035,深圳市输血医学研究所
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目的 建立简易的RHD合子型直接测定方法.方法根据RHD基因序列和RHD基因缺失的原理设计两对引物,分别特异性针对RHD基因第一外显子和融合Rh盒子,再引入一对内对照引物,建立新的双管复式PCR方法;并用于检测152份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本、以及359份已知Rh表型样本的RHD合子型.检测结果与使用近期报道的限制性片段长度多态性(RFLP)技术的鉴定结果相比较.结果 152份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本包括92份Rh阴性、28份D放散型、3例部分D表型、5例弱D型及24例Rh阳性样品,全部样品的RHD合子型PCR检测结果均与已知的基因型相符合,可直接判断RHD(+)/RHD(+)、RHD(+)/RHD(-)和RHD(-)/RHD(-)三种合子型;359份已知Rh表型的样本,包括12例孕妇配偶、18名家系成员、48例Rh阴性及281例Rh阳性捐血者,PCR检测结果,除一例外,均与RFLP结果一致.该个例PCR检测为RHD(+)/RHD(-)杂合型,而RFLP结果为RHD(-)/RH1D(-)纯合型,由于个例为Rh阳性表型,肯定存在至少一条RHD基因,所以显然RFLP检测下游Rh盒子出现假阴性.结论双管PCR技术鉴定RHD合子型,简便、快速,具有较高的准确率,可常规用于临床或血库实验室。
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