茄子U6启动子克隆及CRISPR/Cas9介导的基因编辑体系建立

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利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)U6 RNA保守序列从茄子(Solanum melongena L.)基因组中鉴定到7个U6 RNA,采用PCR技术成功克隆到这7个U6 RNA的启动子序列。GUS染色结果表明4个茄子U6启动子(SmU6-1P、SmU6-2P、SmU6-4P、SmU6-7P)具有转录活性。构建以SmU6-1P/AtU6-P驱动SmWRKY4 sgRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过农杆菌介导侵染茄子子叶外植体得到T0代植株。以T0代植株的DNA为模板扩增WRKY4片段并对产物测序,测序结果显示以SmU6-1P构建的CRISPR/Cas9载体能靶向编辑SmWRKY4基因,编辑率为27.0%。在基于AtU6-P的T0代植株中未检测到碱基突变,表明在茄子遗传转化中,茄子SmU6启动子编辑效率高于拟南芥AtU6启动子。
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