目的:应用网络药理学和实验验证,分析黑骨藤靶向肿瘤坏死因子-α（TNF-α）治疗类风湿关节炎的药效物质基础。方法:课题组前期研究发现黑骨藤醇提组分（CDLF,CQAF）具有显著抗类风湿关节炎（RA）活性,并鉴定出10个具有抗RA的活性单体。应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）,以白细胞介素-6（IL-6）,一氧化氮（NO）,白细胞介素-1β（IL-1β）和前列腺素E2（PGE2）为指标比较活性单体,CDLF和CQAF组分抗RA活性;网络药理学分析黑骨藤抗RA可能的分子机制;TNF-α分子对接、表面等离子分子互作（SPR）技术和TNF-α诱导L929损伤模型验证黑骨藤化学单体靶向TNF-α能力。结果:ELISA发现,CDLF和CQAF组分抗RA活性明显高于鉴定出的10个活性单体;网络药理学分析,发现黑骨藤抗RA的核心靶点为信号传导及转录因子3（STAT3）,肿瘤坏死因子（TNF）和IL-6,基因本体（GO）富集有胶原分解代谢、炎症反应,核转录因子（NF）-κB转录因子活性的正调控,B细胞增殖的正调控等,基于京都基因与基因组百科全书（EKGG）富集有TNF信号通路,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路,NF-κB信号通路,Toll样受体信号通路,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等;TNF-α分子对接,SPR技术和TNF-α诱导L929损伤模型实验发现,CDLF和CQAF组分具有较好的结合并拮抗TNF-α的活性,但从两组分中分离鉴定的活性成分,并没有表现出与CDLF和CQAF组分一致的抗TNF-α活性。结论:黑骨藤的CDLF和CQAF组分可能通过靶向TNF-α治疗RA,实验发现已分离的化学成分与TNF-α结合活性低于CDLF和CQAF组分,同时课题组在黑骨藤药材中分离到最低质量分数为0.25 ng·g-1的化学成分,说明与TNF-α结合而产生抗RA活性成分可能为痕量成分。