论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：建立以高效液相色谱法测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊含量的测定方法。方法：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵缓冲液（39g醋酸铵，加水至810ml，加三乙胺30ml，加冰醋酸10ml，加磷酸30ml）-乙腈（85∶15）为流动相，流速为10m/min，检测波长为280nm，进样量为10μl。结果：琥珀酸美托洛尔进样量在03208～12832μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r= 09992）；平均加样回收率为1001%（RSD=12%，n=6）。结论：本方法简单、快速、准确、稳定、重现性好。
【关键词】 琥珀酸美托洛尔缓释胶囊；高效液相色谱法；含量
【中图分类号】R9272 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0030-02
美托洛尔为全球首个选择性的β1受体阻滞剂，于1969年在瑞典的Hassle实验室研发成功，已经广泛应用于高血压、缺血性心脏病、慢性稳定性心力衰竭、心律失常等多种心血管疾病的治疗。琥珀酸美托洛尔缓释胶囊是根据缓释片改剂型开发的品种，琥珀酸美托洛尔及其制剂收载于各国药典[1-2，4]的含量测定方法为高效液相色谱法，但各方法不能完全排除有关物质的干扰。本文对现有的HPLC法进行优化，用以测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊的含量。
1 仪器与试药
11 仪器 日本岛津LC-20A高效液相色谱仪；ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（46mm×150mm，5μm）。
12 试药 琥珀酸美托洛尔对照品购自英国LGC标准品（批号：21603）；琥珀酸美托洛尔缓释胶囊样品（批号：20140615、20140618、20140621，自制）；乙腈为色谱纯；实验试剂均为分析纯；水为注射用水。
2 方法与结果
21 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（46mm×150mm，5μm）；流动相：醋酸铵缓冲液（39g 醋酸铵，加水至810ml，加三乙胺30 ml，加冰醋酸10ml，加磷酸30ml）-乙腈（85∶15）；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：10ml/min；进样量：10μl。
22 检测波长的选择 取琥珀酸美托洛尔对照品适量，加流动相溶解，以流动相为空白，在400～200nm波长范围内扫描，结果表明琥珀酸美托洛尔在280nm的波长处有最大吸收，故选择280nm作为本品的检测波长。
23 溶液的制备
231 对照品溶液 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml约含80μg的溶液。
232 供试品溶液 取供试品10粒，倒出内容物（白色缓释微丸），研细，精密称取细粉适量（约相当于琥珀酸美托洛尔100mg），置250ml量瓶中，加流动相适量，超声处理30min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
24 方法学考察
241 精密度测定 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液，进样6次，测定峰面积值，其相对标准偏差为009%。
242 专属性考察 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液、琥珀酸美托洛尔缓释胶囊供试品溶液及不含琥珀酸美托洛尔的阴性对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：琥珀酸美托洛尔与其他物质的分离符合规定，阴性样品在此条件下无干扰，高效液相色谱图见图1。
243 标准曲线的制备 精密称取琥珀酸美托洛尔对照品802mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至浓度，摇匀。分别精密量取4、6、8、12、16μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，以进样量X为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=50520X+16401（r=09992）。结果表明，琥珀酸美托洛尔在03208～12832μg范围内呈良好的线性关系。
244 重复性试验 取同一批号（20140615）的样品6份，分别依法制成供试品溶液，测定琥珀酸美托洛尔的含量，其相对标准偏差RSD为064%，表明本法重现性较好。
245 稳定性试验 取新制备的供试品溶液，精密吸取10μl，分别于0、6、12、16、24h内分别进样，记录琥珀酸美托洛尔峰面积，其相对标准偏差RSD为012%，表明在24h内溶液稳定。
246 加样回收率 精密称取已知含量（235mg/g）的样品研细内容物（批号20140615）适量（约相当于琥珀酸美托洛尔10mg），共6份，分别精密加入琥珀酸美托洛尔原料适量（约相当于琥珀酸美托洛尔100mg，原料含量为986%），按拟定的含量测定方法，测定琥珀酸美托洛尔含量，平均回收率为1001 %，RSD为12%，表明本法具有良好的回收率。
247 样品测定 连续3批样品按上述方法制备样品溶液，精密量取对照品溶液及样品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，按外标法计算，结果批号20140615、20140618及20140621批琥珀酸美托洛尔缓释胶囊中琥珀酸美托洛尔含量分别为标示量的998%、997%和995%。
3 讨论
在色谱系统流动相及色谱柱的选择中，先后开展了对不同来源的含量测定法方法进行比较的研究实验。采用琥珀酸美托洛尔USP含量测定方法[1]，实验证明，选用该流动体系进行检测色谱柱耐受性差；采用琥珀酸美托洛尔缓释片USP含量测定方法[2]，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔缓释片进口注册标准含量测定方法[3]，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔EP含量测定方法[4]，实验证明，选用该色谱条件进行检测，保留时间过长，通过调整色谱柱类型C18调整为C8柱，结果当以醋酸铵缓冲液（39g 醋酸铵，加水至810ml，加三乙胺30ml，加冰醋酸10ml，加磷酸30ml）-乙腈，（85∶15）为流动相时，保留时间合适，琥珀酸美托洛尔峰形对称，且与其他杂质峰均能达到基线分离，通过对样品破坏后DAD检测试验结果表明，色谱峰纯度亦符合要求。
参考文献
[1] United States Pharmacopeia （31）[S].26：2696.
[2] 美国药典委员会.修订公告.2012.
[3] 国家药品标准.琥珀酸美托洛尔缓释片进口药品注册标准[S].2002.
[4] European Pharmacopoeia[S].60：2409-2410.
（收稿日期：20141203）
【关键词】 琥珀酸美托洛尔缓释胶囊；高效液相色谱法；含量
【中图分类号】R9272 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0030-02
美托洛尔为全球首个选择性的β1受体阻滞剂，于1969年在瑞典的Hassle实验室研发成功，已经广泛应用于高血压、缺血性心脏病、慢性稳定性心力衰竭、心律失常等多种心血管疾病的治疗。琥珀酸美托洛尔缓释胶囊是根据缓释片改剂型开发的品种，琥珀酸美托洛尔及其制剂收载于各国药典[1-2，4]的含量测定方法为高效液相色谱法，但各方法不能完全排除有关物质的干扰。本文对现有的HPLC法进行优化，用以测定琥珀酸美托洛尔缓释胶囊的含量。
1 仪器与试药
11 仪器 日本岛津LC-20A高效液相色谱仪；ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（46mm×150mm，5μm）。
12 试药 琥珀酸美托洛尔对照品购自英国LGC标准品（批号：21603）；琥珀酸美托洛尔缓释胶囊样品（批号：20140615、20140618、20140621，自制）；乙腈为色谱纯；实验试剂均为分析纯；水为注射用水。
2 方法与结果
21 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（46mm×150mm，5μm）；流动相：醋酸铵缓冲液（39g 醋酸铵，加水至810ml，加三乙胺30 ml，加冰醋酸10ml，加磷酸30ml）-乙腈（85∶15）；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：10ml/min；进样量：10μl。
22 检测波长的选择 取琥珀酸美托洛尔对照品适量，加流动相溶解，以流动相为空白，在400～200nm波长范围内扫描，结果表明琥珀酸美托洛尔在280nm的波长处有最大吸收，故选择280nm作为本品的检测波长。
23 溶液的制备
231 对照品溶液 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml约含80μg的溶液。
232 供试品溶液 取供试品10粒，倒出内容物（白色缓释微丸），研细，精密称取细粉适量（约相当于琥珀酸美托洛尔100mg），置250ml量瓶中，加流动相适量，超声处理30min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
24 方法学考察
241 精密度测定 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液，进样6次，测定峰面积值，其相对标准偏差为009%。
242 专属性考察 精密量取琥珀酸美托洛尔对照品溶液、琥珀酸美托洛尔缓释胶囊供试品溶液及不含琥珀酸美托洛尔的阴性对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：琥珀酸美托洛尔与其他物质的分离符合规定，阴性样品在此条件下无干扰，高效液相色谱图见图1。
243 标准曲线的制备 精密称取琥珀酸美托洛尔对照品802mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至浓度，摇匀。分别精密量取4、6、8、12、16μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，以进样量X为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=50520X+16401（r=09992）。结果表明，琥珀酸美托洛尔在03208～12832μg范围内呈良好的线性关系。
244 重复性试验 取同一批号（20140615）的样品6份，分别依法制成供试品溶液，测定琥珀酸美托洛尔的含量，其相对标准偏差RSD为064%，表明本法重现性较好。
245 稳定性试验 取新制备的供试品溶液，精密吸取10μl，分别于0、6、12、16、24h内分别进样，记录琥珀酸美托洛尔峰面积，其相对标准偏差RSD为012%，表明在24h内溶液稳定。
246 加样回收率 精密称取已知含量（235mg/g）的样品研细内容物（批号20140615）适量（约相当于琥珀酸美托洛尔10mg），共6份，分别精密加入琥珀酸美托洛尔原料适量（约相当于琥珀酸美托洛尔100mg，原料含量为986%），按拟定的含量测定方法，测定琥珀酸美托洛尔含量，平均回收率为1001 %，RSD为12%，表明本法具有良好的回收率。
247 样品测定 连续3批样品按上述方法制备样品溶液，精密量取对照品溶液及样品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，按外标法计算，结果批号20140615、20140618及20140621批琥珀酸美托洛尔缓释胶囊中琥珀酸美托洛尔含量分别为标示量的998%、997%和995%。
3 讨论
在色谱系统流动相及色谱柱的选择中，先后开展了对不同来源的含量测定法方法进行比较的研究实验。采用琥珀酸美托洛尔USP含量测定方法[1]，实验证明，选用该流动体系进行检测色谱柱耐受性差；采用琥珀酸美托洛尔缓释片USP含量测定方法[2]，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔缓释片进口注册标准含量测定方法[3]，实验证明，主峰出峰过早，混合杂质分离度不符合要求；采用琥珀酸美托洛尔EP含量测定方法[4]，实验证明，选用该色谱条件进行检测，保留时间过长，通过调整色谱柱类型C18调整为C8柱，结果当以醋酸铵缓冲液（39g 醋酸铵，加水至810ml，加三乙胺30ml，加冰醋酸10ml，加磷酸30ml）-乙腈，（85∶15）为流动相时，保留时间合适，琥珀酸美托洛尔峰形对称，且与其他杂质峰均能达到基线分离，通过对样品破坏后DAD检测试验结果表明，色谱峰纯度亦符合要求。
参考文献
[1] United States Pharmacopeia （31）[S].26：2696.
[2] 美国药典委员会.修订公告.2012.
[3] 国家药品标准.琥珀酸美托洛尔缓释片进口药品注册标准[S].2002.
[4] European Pharmacopoeia[S].60：2409-2410.
（收稿日期：20141203）