论文部分内容阅读
目的
探讨微RNA(miR)-758对肝癌细胞转移的影响及其作用机制，研究miR-758对促癌基因星形细胞上调基因1(AEG-1)的调控作用。
方法用miR-758瞬时转染HepG2细胞，通过Transwell迁移和侵袭实验，观察miR-758对肿瘤细胞转移的影响。利用CCK8法检测细胞增殖活性，观察miR-758对肿瘤细胞增殖的影响。使用流式细胞仪定量分析细胞周期，观察miR-758对细胞周期的影响。通过上皮间充质转化(EMT)实验，观察miR-758是否影响肝癌细胞EMT。用miR-758瞬时转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，观察miR-758对管腔形成的影响。软件预测显示miR-758的靶基因为AEG-1。将含miR-758结合位点的AEG-1 3′UTR构建到荧光素酶表达载体中，用miR-758和AEG-1基因3′UTR载体共同转染HepG2细胞，验证miR-758的靶基因是否为AEG-1。用miR-758瞬时转染HepG2细胞，检测AEG-1蛋白的表达量变化。
结果miR-758过表达可抑制HepG2细胞的迁移、侵袭，抑制细胞增殖和周期，抑制HepG2细胞EMT，抑制HUVEC细胞管腔形成。miR-758和AEG-1基因3′UTR质粒共同转染HepG2细胞后，荧光素酶的表达量降低。miR-758靶点AEG-1 3′UTR突变后，荧光素酶的表达量恢复。另外，细胞中miR-758含量升高时，Western Blot检测到AEG-1蛋白水平的表达量降低。
结论miR-758负调控癌症转移的多个步骤，包括细胞迁移、侵袭、增殖、EMT以及血管新生等。miR-758下游靶基因为AEG-1。