【摘 要】
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以大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7,E.coli O157:H7)为研究模式菌,构建了基于醛基化磁珠(Aldehyde magnetic beads,AMBs)、滚环扩增技术(Rolling circle amplifica
【机 构】
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上海海洋大学食品学院,上海201306;上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心,上海201306;农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海),上海201306
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以大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7,E.coli O157:H7)为研究模式菌,构建了基于醛基化磁珠(Aldehyde magnetic beads,AMBs)、滚环扩增技术(Rolling circle amplification,RCA)和DNA水凝胶可视化快速检测的适配体生物传感器(Aptasensor)用于食品安全检测.制备了Mbs@dsDNA(Double-stranded DNA,dsDNA)杂交复合物,当待测物中含有E.coli O157:H7时,其与磁珠表面的适配体序列发生特异性识别,将含有引发序列的适配体链释放至上清液中.通过磁响应分离收集上清液,上清液中的适配体引发探针与成环序列杂交形成挂锁探针,添加T4 DNA连接酶、phi 29 DNA聚合酶和dNTPs等引发RCA;当待测物中不含E.coli O157:H7时,无法引发RCA.本研究使用两条成环序列,其部分碱基互补.这两条成环序列的挂锁探针经过RCA后生成两条可部分互补杂交的长单链DNA(Single-stranded DNA,ssDNA)产物,两管ssDNA产物振荡孵育,可形成裸眼可见的DNA水凝胶,从而实现E.coli O157:H7的可视化检测.本方法可在1 h内实现最低浓度为4×103 CFU/mL的E.coli O157:H7的可视化检测,检测时间低至30 min,具有较高的灵敏度和特异性,且操作简便、快速,不需要大型仪器,在食品安全检测方面具有潜在的应用前景.
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