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【摘要】 目的:分析交叉配血试验过程中存在纤维蛋白原干扰的原因,寻找去除的方法。方法:采用细玻璃棒碾压、交叉配血标本恒温孵育等方法,将交叉配血过程中疑似存在纤维蛋白原干扰结果判断的情况进行处理。结果:通过采用上述方法,基本可以去除交叉配血试验过程中纤维蛋白原的干扰。结论:应避免使用血浆或部分抗凝标本进行交叉配血试验,应尽可能采用血清。如存在纤维蛋白原的干扰,可采用上述方法去除。
【关键词】 交叉配血;纤维蛋白原;干扰;去除
【中图分类号】 R457.1+3【文献标识码】 B【文章编号】 1007-8517(2009)24-0046-01
临床输注全血或成分血液(如血小板、红细胞等)时需要做交叉配血试验,尽管此类试验方法比较多,但最终往往通过观察红细胞凝集情况和溶血变化来对结果进行判断。
1 试验材料和标本来源
1.1 试验材料 25mmol/L的CaCl2溶液、8.5g/L的NaCl溶液、109mmol/L的枸橼酸钠溶液、50g/L的葡萄糖溶液(1000ml加EDTA-Na22g,少量叠氮钠防腐)、复悬液(0.2mmol/L的枸橼酸三钠溶液60ml,加50g/L的葡萄糖溶液40ml),细玻璃棒1根。
1.2 标本来源 临床交叉配血中遇到的26例疑似存在纤维蛋白原干扰的标本。
2 方法
2.1 生理盐水交叉配血法 ①取受血者和供血者血液各2ml,注入一清洁干燥试管内,按常规方法分离血清。同时留数滴滴加于含少量生理盐水的小试管内,制成5%的红细胞生理盐水悬液。注意要分别标明供血者与受血者的血液管、血清管、红细胞悬液管的姓名。②另取清洁试管2支,标明主侧和次侧。主侧:受血者血清1滴加供血者红细胞悬液1滴。次侧:供血者血清1滴加受血者红细胞悬液1滴。③分别混匀,低速离心约2min,轻轻摇匀,观察结果。④结果判定:同型配血,主侧、次侧均不凝集,表示无配血禁忌,可以输血;异型配血时,主侧无凝集,次侧凝集,无溶血,可以输给少量。输异型血时,如次侧不凝集,不可以输血,应重新复查血型或追查其原因。
2.2 手工凝集胺技术交叉配血法 该方法是利用低离子介质减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞与血清或血浆中抗体结合。凝聚胺溶解产生的正电荷能中和红细胞膜表面带有负电荷的唾液酸使红细胞的Zete电位降低,红细胞之间距离缩短,使红细胞发生非特异性凝集,此凝集是可逆的[1]。当再加入复悬液,枸橼酸根离子的负电荷能与凝聚胺上的正电荷中和,使非免疫性的可逆聚合现象消失,结果为阴性,而真正的凝集无法散开为阳性结果。具体操作步骤为:①取试管2支,标明主、次侧,主侧管加受血者血清或血浆2滴,供血者3%~5%细胞悬液1滴。次侧管加供血者血清或血浆2滴和受血者3%~5%红细胞悬液1滴。各加50g/L的葡萄糖溶液0.6ml混匀,再加凝聚胺溶液2滴,再次混匀。②以3500转/min离心10s,弃上清液,管底留溶液0.1ml液体,轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集。如无凝集,则需重做。③加复悬液2滴,轻轻转动试管,混合,同时观察结果。④结果判定:在30s内凝集散开,配血结果相合;如凝集不散开,配血结果不相合,结果不易判断,应镜检鉴别。
2.3 干扰去除的方法 疑似凝集或存在纤维蛋白原干扰时,用细玻璃棒对凝集(聚)块轻轻碾压,来进行鉴别。碾压后,在显微镜下,红细胞呈现分散状态,且红细胞形态改变,则该现象为假凝集,报告无凝集。疑似抗凝标本或部分抗凝标本,滴入数滴25mmol/L的CaCl2溶液(必要时滴入测定凝血酶原时间用的组织凝血活酶浸出液1~2滴),37℃水浴放置数分钟后,离心,取血清来配血。
3 结果和讨论
在交叉配血过程中,如果发现有红细胞凝集成堆,周围有较多分散状态的红细胞,则有可能是纤维蛋白原的存在而造成的红细胞假凝集,应进行鉴别。临床上在做交叉配血试验过程中出现纤维蛋白原的干扰,常见的原因是使用了血浆配血。出现用血浆配血的主要原因有:①血袋留作配血用的管段由于种种原因,封存的是抗凝血(存在纤维蛋白原干扰的袋血常见于血液采集时间在3~5d内);②为了急诊需要,受血者标本采集时,加了抗凝剂(为了节省受血者血液凝集析出血清的时间);③为了做受血者红细胞悬液的方便,采集受血者血标本时进行了抗凝处理(按照全国临床检验操作规程,标本不抗凝,使用血清);④一些成品试剂盒(如凝集胺试剂)操作说明书明确注明用血清或血浆来交叉配血,没有强调用血清。如血浆存在大量的纤维蛋白原,则在交叉配血试验过程中有可能被激活而凝集,在聚集过程中,夹带红细胞,造成红细胞凝集,干扰交叉配血结果的判断。如因血袋留作配血用的管段抗凝,或使用抗凝剂等其他原因致使血液未完全凝集,造成了配血过程中红细胞有凝集(聚)现象,在显微镜下红细胞呈现凝集(聚)现象,可采用细玻璃棒碾压进行鉴别。疑似抗凝或部分抗凝受血者标本,应将标本恒温孵育离心后在进行交叉配血试验。作者将临床上常用的生理盐水交叉配血法和手工凝集胺技术交叉配血法分别进行了实验,对疑似存在纤维蛋白原干扰标本采取了上述措施中的方法,排除了在交叉配血过程中存在的干扰。为了排除纤维蛋白原的干扰,应尽可能使用血清来进行交叉配血试验。这不仅要求送检受血者标本不抗凝,更重要的是血库留做配血的标本应不抗凝(临床上封存于血袋上,用于交叉配血试验管段呈抗凝状态比较多见)。而采用加温孵育法去除交叉配血过程中纤维蛋白原干扰较细玻璃棒碾压法繁琐,但较后者可靠,必要时可成为或者核实的方法。
参考文献
[1] 潘纪春,于洋.玻片凝聚胺交叉配血方法学评价[J]..科学技术与工程,2007,7(20):5342-5344.
【关键词】 交叉配血;纤维蛋白原;干扰;去除
【中图分类号】 R457.1+3【文献标识码】 B【文章编号】 1007-8517(2009)24-0046-01
临床输注全血或成分血液(如血小板、红细胞等)时需要做交叉配血试验,尽管此类试验方法比较多,但最终往往通过观察红细胞凝集情况和溶血变化来对结果进行判断。
1 试验材料和标本来源
1.1 试验材料 25mmol/L的CaCl2溶液、8.5g/L的NaCl溶液、109mmol/L的枸橼酸钠溶液、50g/L的葡萄糖溶液(1000ml加EDTA-Na22g,少量叠氮钠防腐)、复悬液(0.2mmol/L的枸橼酸三钠溶液60ml,加50g/L的葡萄糖溶液40ml),细玻璃棒1根。
1.2 标本来源 临床交叉配血中遇到的26例疑似存在纤维蛋白原干扰的标本。
2 方法
2.1 生理盐水交叉配血法 ①取受血者和供血者血液各2ml,注入一清洁干燥试管内,按常规方法分离血清。同时留数滴滴加于含少量生理盐水的小试管内,制成5%的红细胞生理盐水悬液。注意要分别标明供血者与受血者的血液管、血清管、红细胞悬液管的姓名。②另取清洁试管2支,标明主侧和次侧。主侧:受血者血清1滴加供血者红细胞悬液1滴。次侧:供血者血清1滴加受血者红细胞悬液1滴。③分别混匀,低速离心约2min,轻轻摇匀,观察结果。④结果判定:同型配血,主侧、次侧均不凝集,表示无配血禁忌,可以输血;异型配血时,主侧无凝集,次侧凝集,无溶血,可以输给少量。输异型血时,如次侧不凝集,不可以输血,应重新复查血型或追查其原因。
2.2 手工凝集胺技术交叉配血法 该方法是利用低离子介质减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞与血清或血浆中抗体结合。凝聚胺溶解产生的正电荷能中和红细胞膜表面带有负电荷的唾液酸使红细胞的Zete电位降低,红细胞之间距离缩短,使红细胞发生非特异性凝集,此凝集是可逆的[1]。当再加入复悬液,枸橼酸根离子的负电荷能与凝聚胺上的正电荷中和,使非免疫性的可逆聚合现象消失,结果为阴性,而真正的凝集无法散开为阳性结果。具体操作步骤为:①取试管2支,标明主、次侧,主侧管加受血者血清或血浆2滴,供血者3%~5%细胞悬液1滴。次侧管加供血者血清或血浆2滴和受血者3%~5%红细胞悬液1滴。各加50g/L的葡萄糖溶液0.6ml混匀,再加凝聚胺溶液2滴,再次混匀。②以3500转/min离心10s,弃上清液,管底留溶液0.1ml液体,轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集。如无凝集,则需重做。③加复悬液2滴,轻轻转动试管,混合,同时观察结果。④结果判定:在30s内凝集散开,配血结果相合;如凝集不散开,配血结果不相合,结果不易判断,应镜检鉴别。
2.3 干扰去除的方法 疑似凝集或存在纤维蛋白原干扰时,用细玻璃棒对凝集(聚)块轻轻碾压,来进行鉴别。碾压后,在显微镜下,红细胞呈现分散状态,且红细胞形态改变,则该现象为假凝集,报告无凝集。疑似抗凝标本或部分抗凝标本,滴入数滴25mmol/L的CaCl2溶液(必要时滴入测定凝血酶原时间用的组织凝血活酶浸出液1~2滴),37℃水浴放置数分钟后,离心,取血清来配血。
3 结果和讨论
在交叉配血过程中,如果发现有红细胞凝集成堆,周围有较多分散状态的红细胞,则有可能是纤维蛋白原的存在而造成的红细胞假凝集,应进行鉴别。临床上在做交叉配血试验过程中出现纤维蛋白原的干扰,常见的原因是使用了血浆配血。出现用血浆配血的主要原因有:①血袋留作配血用的管段由于种种原因,封存的是抗凝血(存在纤维蛋白原干扰的袋血常见于血液采集时间在3~5d内);②为了急诊需要,受血者标本采集时,加了抗凝剂(为了节省受血者血液凝集析出血清的时间);③为了做受血者红细胞悬液的方便,采集受血者血标本时进行了抗凝处理(按照全国临床检验操作规程,标本不抗凝,使用血清);④一些成品试剂盒(如凝集胺试剂)操作说明书明确注明用血清或血浆来交叉配血,没有强调用血清。如血浆存在大量的纤维蛋白原,则在交叉配血试验过程中有可能被激活而凝集,在聚集过程中,夹带红细胞,造成红细胞凝集,干扰交叉配血结果的判断。如因血袋留作配血用的管段抗凝,或使用抗凝剂等其他原因致使血液未完全凝集,造成了配血过程中红细胞有凝集(聚)现象,在显微镜下红细胞呈现凝集(聚)现象,可采用细玻璃棒碾压进行鉴别。疑似抗凝或部分抗凝受血者标本,应将标本恒温孵育离心后在进行交叉配血试验。作者将临床上常用的生理盐水交叉配血法和手工凝集胺技术交叉配血法分别进行了实验,对疑似存在纤维蛋白原干扰标本采取了上述措施中的方法,排除了在交叉配血过程中存在的干扰。为了排除纤维蛋白原的干扰,应尽可能使用血清来进行交叉配血试验。这不仅要求送检受血者标本不抗凝,更重要的是血库留做配血的标本应不抗凝(临床上封存于血袋上,用于交叉配血试验管段呈抗凝状态比较多见)。而采用加温孵育法去除交叉配血过程中纤维蛋白原干扰较细玻璃棒碾压法繁琐,但较后者可靠,必要时可成为或者核实的方法。
参考文献
[1] 潘纪春,于洋.玻片凝聚胺交叉配血方法学评价[J]..科学技术与工程,2007,7(20):5342-5344.