【摘 要】
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目的 ：探讨直流电刺激（direct current stimulation,DCS）对人口腔黏膜成纤维细胞（human oral mucosa fibroblast,hOMF）增殖的影响及相关机制。方法：以不同强度（0、10、25、50、100μA）、时长（0、5、10、30、60 min）、频率（0、1、2、3次/d）的DCS作用于hOMF，应用CCK-8法检测细胞增殖情况。通过酶联免疫吸附试
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔颌面-头颈肿瘤科国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所
【基金项目】
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上海交通大学医工（理）交叉基金（YG2017MS02）；
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目的 ：探讨直流电刺激（direct current stimulation,DCS）对人口腔黏膜成纤维细胞（human oral mucosa fibroblast,hOMF）增殖的影响及相关机制。方法：以不同强度（0、10、25、50、100μA）、时长（0、5、10、30、60 min）、频率（0、1、2、3次/d）的DCS作用于hOMF，应用CCK-8法检测细胞增殖情况。通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测DCS组与对照组（接种的细胞贴壁后，随机设置DCS组及对照组）24、48 h细胞培养上清液中表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的浓度。通过蛋白质印迹法（Western blotting）检测经DCS后的hOMF中蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian rapamycin target protein,mTOR）及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian rapamycin target protein,p-mTOR）、磷酸酶和张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN）的表达水平。结果：通过检测DCS强度梯度、时间梯度、频率梯度的吸光度值可知，25μA的电流强度（P＜0.01）、10 min的刺激时长（P＜0.001）及2次/d的刺激频率（P＜0.01）为hOMF的显著增殖刺激条件。相较于对照组，DCS组24 h和48 h细胞培养上清液中VEGF的浓度均有所升高，24 h培养上清液中的VEGF浓度升高更为明显（P＜0.01）。在不同时长的DCS下，刺激5、10 min后的p-mTOR和p-Akt的蛋白表达升高（P＜0.05）,PTEN的蛋白表达降低（P＜0.001）。结论：DCS可促进hOMF的增殖，诱导细胞因子VEGF的高表达，可能与PTEN/Akt/mTOR信号通路的激活有关。
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