【摘 要】
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目的 验证结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)基因Rv2626c编码的低氧反应蛋白1(hypoxic response protein 1,HRP1)为分泌蛋白.方法 从Mtb H37Rv标准毒力株基因组
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院 感染免疫研究室 成都 610041
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目的 验证结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)基因Rv2626c编码的低氧反应蛋白1(hypoxic response protein 1,HRP1)为分泌蛋白.方法 从Mtb H37Rv标准毒力株基因组上扩增目的基因并添加His标签;运用扩增产物构建重组质粒,电转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)(MC2155)构建重组菌;热诱导重组菌表达蛋白,检测培养滤液及细菌裂解液中蛋白的表达情况,将10 kDa培养滤液抗原(CFP-10)(Ms)和CFP-10(Mtb)设为阳性对照,将胞质蛋白热休克蛋白65(GroEL2)(Mtb)作为阴性对照.结果 PCR成功扩增HRP1、GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms),并且重组质粒测序峰单一且信号稳定,鉴定重组质粒构建成功.成功构建重组Ms并实现蛋白GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms)、HRP1在Ms中的表达.在重组菌裂解液中和培养基滤液中均检测到目标蛋白HRP1;结果与阳性对照CFP-10一致;阴性对照GroEL2(Mtb)仅在细菌裂解液中检测到,在培养滤液在未检测到.结论 Mtb基因Rv2626c编码的蛋白HRP1可以通过Ms的分泌系统分泌到细菌外,作为Mtb分泌蛋白,在Mtb致病机制中发挥作用.
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