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【摘要】目的 探讨补精复方对肝损伤的保护作用。方法 以四氯化碳(CCL4)肝损伤大鼠为模型,联苯双酯为阳性对照药,观察补精复方对CCL4致肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素及病理切片的影响。结果 补精复方可以降低急性肝损伤大鼠ALT、AST和总胆红素水平,与CCl4模型组比较有显著差异;从肝脏病理切片来看,随着补精复方剂量的增加,肝小叶结构破坏及炎症细胞浸润程度逐渐减轻。结论 补精复方对CCl4化学性肝损伤具有保护作用。
【中图分类号】Q485 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)03-000-02
接触化学性毒物(如四氯化碳)、酒精、医源性药物损害是导致化学性肝损伤的主要途径。为减少此种损伤的发生率,有必要开发具有护肝作用的天然保健品。补精复方是江苏名医章永红教授的临床验方,由黄精20-30克、枸杞子10-15克、女贞子10-15克、天冬10-15克组成,药物既符合《中华人民共和国药典》(2005年版)相应规定的开发成食品的要求,亦符合《保健食品注册管理办法》的规定。补精复方具有补肝保肝作用,在前期治疗53例化学性肝损伤患者的临床观察中,对比治疗前后患者的肝功能指标,结果总有效率达98.1%。本研究以大鼠为实验对象,探讨补精复方对CC14损伤性肝脏肝功能及病理切片的影响,从基础研究层面探讨其保肝作用。
1 实验材料
1.1 动物
SD清洁级大鼠72只,雄性,体重180-200g。由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。生产许可证:SCXK(沪)2007-0005。使用许可证:SYXK(苏)2007-0030。
1.2 药物
参照临床用量为75g/人/天,补精复方中药的鉴定和提取由本校植物药及药化教研室完成,批号:090519;规格:2.67g/ml。联苯双酯滴丸:北京协和药厂,批号:09020106.
1.3 实验试剂
ALT、AST、总胆红素测试盒,批号: 20090831,购自宁建成生物工程研究所。
1.4 实验仪器
Spectrum754紫外可见分光光度计ZW060411604, Shandon全封闭程控式组织处理机、包埋机、手动切片机、全自动染色机;OLYMPUS显微镜。
表1 各组大鼠血清ALT、AST和总胆红素含量比较(±s) n=10
表2 补精复方对受试动物肝脏病理变化 (只)
1.5 实验条件
控制室温20-25℃,相对湿度 50-70%,气流速度 0.13-0.18m/分。
实验动物为笼养,每笼饲养同性别动物12只。
2 实验方法
实验动物随机分为6组,即模型组、联苯双酯组、补精复方低、中、高剂量组及正常组,每组大鼠12只。补精复方低、中、高剂量组及联苯双酯组大鼠分别于肝损伤前9天,每日以3. 375、6.75、13.5、4.05mg/kg灌胃1次,模型组和正常组大鼠灌胃等容量0. 9%生理盐水。末次给药后1h,参照文献[1]方法除正常组外,其余5组大鼠于腹腔注射10% CCl4溶液5mL/kg,正常组大鼠腹腔注射等容量0. 9%生理盐水。造模由多人同时进行,于30min内完成。注射过程中大鼠无死亡。间隔24h后,采用眼球采血,常规制备血清备检;处死大鼠迅速解剖摘取肝脏。测定血清学指标ALT、AST、胆红素。取各组肝脏各10例,共计60例。常规组织脱水、常规病理切片、HE染色、光镜下读片。
说明:
图1-正常对照组肝脏(10例):肝小叶结构清晰,肝索排列整齐;肝细胞大小基本一致,细胞核大小均一,核膜、核仁清楚,细胞质染色均匀。
图2-模型组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫性破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(9例),伴有大量炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(1例)。
图3-阳性药对照组肝脏(10例):肝小叶结构轻度破坏,中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(7例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(3例)。
图4-补精低剂量组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(3例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(6例),中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(1例)。
图5-补精中剂量组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(1例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(5例),中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(4例)。
图6-补精高剂量组肝脏(10例):肝小叶结构轻度破坏,中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(9例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(1例)。
3 统计方法
计量资料用(±s)表示,用SPSS 11. 0软件包进行统计处理。采用t检验,各组间计量资料比较采用方差分析,P<0. 05为有显著差异。
4 实验结果
(1)补精复方对血清ALT、AST及总胆红素含量的影响(见表1)
(2)补精方对受试动物肝脏病理变化的影响(见表2及附图1-图6)
CCl4对照组和补精方各剂量组动物的肝脏病理改变以肝细胞坏死,气球样变性为主,病变部位主要在肝小叶中央静脉周围。
5 结论与讨论
CCl4是常见的化学性毒物,可导致化学性肝损伤。CCl4肝细胞毒性作用的主要机制是使细胞膜发生脂质过氧化,从而破坏细胞膜结构和功能的完整性,使细胞质内酶类渗入血液中,导致血清酶活性发生改变,同时使细胞发生气球样变和坏死。
补精复方是临床经验方,由枸杞子、女贞子、天冬、黄精组成,具有补益肝肾的作用。临床观察结果显示,本方具有缓解症状、改善肝功能指标的良好疗效。
本实验结果表明,补精方可明显减低CCl4引起的血清ALT、AST及胆红素水平的升高。病理观察发现,补精复方可使CCl4所致动物肝细胞坏死的发生例数明显减少,病变程度明显减轻,具有促进肝细胞再生和肝功能恢复的功能。补精复方的作用与剂量存在量效关系。本实验结果说明保健食品补精复方对CCl4所致化学性肝损伤具有保护作用,值得进一步开发利用。
参考文献
[1]Hao Zhang.Amelioration of rats acute liver injurymodel induced by carbon tetrachloride[J]. China Journal of Modern Medicine, 2004, 14(17): 40-44.
作者单位:1.南京中医药大学第一临床医学院210046
2.南京中医药大学药学院210046
3.南京中医药大学基础医学院210029
【中图分类号】Q485 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)03-000-02
接触化学性毒物(如四氯化碳)、酒精、医源性药物损害是导致化学性肝损伤的主要途径。为减少此种损伤的发生率,有必要开发具有护肝作用的天然保健品。补精复方是江苏名医章永红教授的临床验方,由黄精20-30克、枸杞子10-15克、女贞子10-15克、天冬10-15克组成,药物既符合《中华人民共和国药典》(2005年版)相应规定的开发成食品的要求,亦符合《保健食品注册管理办法》的规定。补精复方具有补肝保肝作用,在前期治疗53例化学性肝损伤患者的临床观察中,对比治疗前后患者的肝功能指标,结果总有效率达98.1%。本研究以大鼠为实验对象,探讨补精复方对CC14损伤性肝脏肝功能及病理切片的影响,从基础研究层面探讨其保肝作用。
1 实验材料
1.1 动物
SD清洁级大鼠72只,雄性,体重180-200g。由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。生产许可证:SCXK(沪)2007-0005。使用许可证:SYXK(苏)2007-0030。
1.2 药物
参照临床用量为75g/人/天,补精复方中药的鉴定和提取由本校植物药及药化教研室完成,批号:090519;规格:2.67g/ml。联苯双酯滴丸:北京协和药厂,批号:09020106.
1.3 实验试剂
ALT、AST、总胆红素测试盒,批号: 20090831,购自宁建成生物工程研究所。
1.4 实验仪器
Spectrum754紫外可见分光光度计ZW060411604, Shandon全封闭程控式组织处理机、包埋机、手动切片机、全自动染色机;OLYMPUS显微镜。
表1 各组大鼠血清ALT、AST和总胆红素含量比较(±s) n=10
表2 补精复方对受试动物肝脏病理变化 (只)
1.5 实验条件
控制室温20-25℃,相对湿度 50-70%,气流速度 0.13-0.18m/分。
实验动物为笼养,每笼饲养同性别动物12只。
2 实验方法
实验动物随机分为6组,即模型组、联苯双酯组、补精复方低、中、高剂量组及正常组,每组大鼠12只。补精复方低、中、高剂量组及联苯双酯组大鼠分别于肝损伤前9天,每日以3. 375、6.75、13.5、4.05mg/kg灌胃1次,模型组和正常组大鼠灌胃等容量0. 9%生理盐水。末次给药后1h,参照文献[1]方法除正常组外,其余5组大鼠于腹腔注射10% CCl4溶液5mL/kg,正常组大鼠腹腔注射等容量0. 9%生理盐水。造模由多人同时进行,于30min内完成。注射过程中大鼠无死亡。间隔24h后,采用眼球采血,常规制备血清备检;处死大鼠迅速解剖摘取肝脏。测定血清学指标ALT、AST、胆红素。取各组肝脏各10例,共计60例。常规组织脱水、常规病理切片、HE染色、光镜下读片。
说明:
图1-正常对照组肝脏(10例):肝小叶结构清晰,肝索排列整齐;肝细胞大小基本一致,细胞核大小均一,核膜、核仁清楚,细胞质染色均匀。
图2-模型组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫性破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(9例),伴有大量炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(1例)。
图3-阳性药对照组肝脏(10例):肝小叶结构轻度破坏,中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(7例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(3例)。
图4-补精低剂量组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(3例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(6例),中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(1例)。
图5-补精中剂量组肝脏(10例):肝小叶结构弥漫破坏,中央静脉周围肝细胞重度变性、坏死(1例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(5例),中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(4例)。
图6-补精高剂量组肝脏(10例):肝小叶结构轻度破坏,中央静脉周围肝细胞轻度变性、坏死(9例),伴有炎症细胞浸润,中央静脉周围肝细胞中度变性、坏死(1例)。
3 统计方法
计量资料用(±s)表示,用SPSS 11. 0软件包进行统计处理。采用t检验,各组间计量资料比较采用方差分析,P<0. 05为有显著差异。
4 实验结果
(1)补精复方对血清ALT、AST及总胆红素含量的影响(见表1)
(2)补精方对受试动物肝脏病理变化的影响(见表2及附图1-图6)
CCl4对照组和补精方各剂量组动物的肝脏病理改变以肝细胞坏死,气球样变性为主,病变部位主要在肝小叶中央静脉周围。
5 结论与讨论
CCl4是常见的化学性毒物,可导致化学性肝损伤。CCl4肝细胞毒性作用的主要机制是使细胞膜发生脂质过氧化,从而破坏细胞膜结构和功能的完整性,使细胞质内酶类渗入血液中,导致血清酶活性发生改变,同时使细胞发生气球样变和坏死。
补精复方是临床经验方,由枸杞子、女贞子、天冬、黄精组成,具有补益肝肾的作用。临床观察结果显示,本方具有缓解症状、改善肝功能指标的良好疗效。
本实验结果表明,补精方可明显减低CCl4引起的血清ALT、AST及胆红素水平的升高。病理观察发现,补精复方可使CCl4所致动物肝细胞坏死的发生例数明显减少,病变程度明显减轻,具有促进肝细胞再生和肝功能恢复的功能。补精复方的作用与剂量存在量效关系。本实验结果说明保健食品补精复方对CCl4所致化学性肝损伤具有保护作用,值得进一步开发利用。
参考文献
[1]Hao Zhang.Amelioration of rats acute liver injurymodel induced by carbon tetrachloride[J]. China Journal of Modern Medicine, 2004, 14(17): 40-44.
作者单位:1.南京中医药大学第一临床医学院210046
2.南京中医药大学药学院210046
3.南京中医药大学基础医学院210029