氯化钻对RNA干扰食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响

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目的研究氯化钴模拟缺氧对RNA干扰的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达及功能的影响,观察在人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制HIF-1α的效果。方法选择4组细胞分别为食管癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1αSiRNA的Eca-109细胞(本实验室编号分别为H2/14号、H3/15号、H2/20号细胞),分别用200、400、600、800μmol/L氯化钴模拟缺氧,缺氧培养时间分别为12、24.48、72h,采用Western印迹和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF—1α蛋白及mRNA表达,同时Western印迹检测血红素加氧酶(HO-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、葡萄糖转运体-1(Glut-1)、P53等相关基因的表达。结果4组细胞HIF-1α蛋白表达均随氯化钴浓度加大而增加,常氧与400μmol/L氯化钴处理24h后筛选出H3/15号细胞HIF-1α蛋白表达最少,与其它3组相比差异有统计学意义(P〈0.05),mRNA检测差异无统计学意义;干扰细胞常氧下HO-1、MMP-2、Glut-1、P53表达不同程度减少,缺氧后HO-1、P53表达增加,MMP-2、Glut-1表达无明显变化。结论RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达,从而不同程度减少HO-1、MMP-2、Glut-1、P53等相关基因表达;经氯化钴模拟缺氧筛选出干扰效果较好的一株细胞,为进一步研究HIF-1α的功能奠定了基础。

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