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【摘要】目的:探讨加味芍药甘草口服液对急性荨麻疹的治疗作用机制。方法:应用双抗体夹心 EL ISA法检测4组样本外周血单一核细胞(PBMC)体外培养上清液中人白细胞介素22(IL-2)及白细胞介素24(IL-4)的水平,结果用Primer统计软件作均数差异 t 检验。结果:治疗前患者 PBMC在体外培养条件下 IL-2水平显著降低(P<0.01),IL-4水平明显增高(P<0.05);治愈组的水平趋于正常(P>0.05);加入该药的体外培养液中 IL-2和 IL-4水平趋于正常(P>0.05)。结论:该药治愈急性荨麻疹患者的重要机制可能在于调节 PBMC分泌 IL-2及 IL-4等 Th1和 Th2类细胞因子的水平,以消除变应性炎症和恢复正常免疫功能。
关键词:加味芍药甘草口服液;单一核细胞,外周血;白细胞介素-2;白细胞介素-4
中图分类号:R758.24 文献标识码:A文章编号:1671-4954(2010)04-238-03
doi:10.3969/j.issn.1671-4954.2010.04.002
Study on Mechanism of Paeoniae Add Glycyrrhizae Oral Liquid Plus in Treating Acute Urticaria
XU Yun2sheng,CHEN De2yu,OU Rong2ying
(Department of Dermatology,Southwest Hospi tal,Chongqing400038,China)
【Abstract 】 ObjectiveTo explore the mechanism of Paeoniae Add Glycyrrhizae Oral Liquid Plus in teating acute urticaria.MethodsMeans of EL ISA assay were used to observe the levels of IL-2 and IL-4 in 4 groups after 3 days culturing of the PBMC. The data were analysized by the Primer channel computer analysized system. Results The level of IL-2 producted by PBMC cultured in patients before treatment was distinctly lower(P <0.01)when compared with that of the cont rol group,while IL-4 was higher(P <0.05);In the patients cured with the oral liquid,the levels of IL-2 and IL-4 were normal(P >0.05);The levels were normal(P >0.05)when cultured with the medicine in patients before treatment .ConclusionOne of the most importtant mechanisms of the cure with the medicine in patients suffering from acute urticaria is that it can regulate the production of Interleukins poduced by Th1or Th2cells,such as IL-2,IL-4etc,so to eliminate allergic inflamation,and restore the immunologic function.
Key words :Paeoniae add glycyrrhizae oral liquid plus ;PBMC,IL-2;IL-4
加味芍药甘草口服液是一种新的抗过敏中成药,研究表明该药具有安全可靠、副作用少、作用快和愈后复发率低等特点,对急、慢性荨麻疹具有满意的疗效[1]。为进一步探讨其治疗作用机制,观察该药对急、慢性荨麻疹患者 PBMC 分泌 IL-2和 IL-4的影响作用,阐明其在该环节上的作用机制,特进行本实验。
材料和方法
1.1临床资料
病例均来源于泸州医学院附属医院皮肤科住院的急性荨麻疹患者,无其他合并症及用药史。治疗前选择30例,男19例,女11例,平均年龄7±6岁,进行两组实验;加味芍药甘草口服液治愈组选择30例,男17例,女13例,平均年龄35±7岁;对照组30例为正常人,男16例,女14例,平均年龄33±7岁。
1.2药物、试剂与仪器
加味芍药甘草口服液:泸医附院制剂室生产,批号9906;IL-2试剂盒和 IL-4试剂盒:由深圳晶美公司提供;HAN KS 液:泸医附院传染免疫研究室配制;Medium 1640 Powder :购自 GIBCO-BRL LABORATORIES,USA ;离心机、二氧化碳孵箱、倒置显微镜、超低湿冷冻冰箱以及酶标仪等由美国购进。
1.3实验方法
1.3.1PBMC体外培养 各组受检者于肘静脉采血2ml(治疗前患者采4ml,等分两份分别做第1、2组实验),以肝素200u 抗凝,密度梯度离心法分离 PBMC,用1640液1ml 重悬后接种到微孔板上,每孔加入植物血凝素(PHA)100μg,细胞浓度为1×106/ ml,治疗前第2组实验是再加入加味芍药甘草口服液,使其浓度达1%。于37℃、5%二氧化碳条件下孵箱内培养72h后取上清液冻存备测。
1.3.2PBMC 培养上清液中IL-2和 IL-4的水平检测严格按照 IL-2试剂盒和 IL-4试剂盒说明的步骤进行操作。
1.3.3结果判断 每个标准品和标本的 OD 值减去零孔的 OD值,以标准品浓度作横坐标,其 OD 值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点,根据标本的OD值,可在标准曲线上查出其浓度。
1.3.4统计学处理 实验结果用x±s 表示,凡进入统计的指标输入Primer软件作均数差异显著性t检验。
2结果
见表1。治疗前实验1组外周血单一核细胞体外培养 IL-2产生水平明显降低(t=2.872,P<0.01),而 IL-4产生水平明显升高(t =2.256,P<0.05)。治愈后的IL-2和IL-4在体外培养时产生水平趋于正常(t值分别为1.591、1.274,P>0.05)。治疗前实验2组外周血单一核细胞体外培养液中加入适量加味芍药甘草口服液,使 IL-2和 IL-4的产生水平趋于正常(t值分别为1.427、1.336,P>0.05)。
3讨论
在Ⅰ型变态反应中,细胞因子在发病机理中及疾病治愈转归过程中均起着重要的作用。IL-2系T淋巴细胞活化过程中由细胞膜所分泌的一种糖蛋白,主要由CD4+和CD8+T细胞产生,分子量为15.42Ku,是参与免疫应答的重要细胞因子,其产生水平变化能反映人体免疫功能的改变[2]。
有报道认为,急性发作期哮喘患儿 PBMC在PHA刺激下产生IL-2水平升高[3,4],其机制有待进一步探讨。符州等[5]的研究表明哮喘患儿 PBMC在PHA刺激下IL-2产生水平明显低于正常对照组。IL-4主要由CD4+T细胞产生,是B细胞生长和分化因子,具有促进 IgG向IgE的类型转换等多种生物学效应,在Ⅰ型变态反应中起重要作用。有报道,哮喘患者中,PBMC经PHA刺激,IL-4产生水平明显增高,增强了气道高反应性[6]。在慢性荨麻疹和季节性变应鼻炎患者中亦明显高于正常对照组[7,8]。
Th2类与 Th1类细胞数目及活性失衡[9],Th2类细胞因子水平显著增高,在Ⅰ型变态反应性疾病中已得到肯定。在细胞因子治疗方面,可通过阻断IL-4等Th2类细胞因子表达或拮抗其活性等途径,以调节两类细胞因子平衡,纠正体内免疫功能失常,消除变应性炎症,从而抑制甚至治愈 Ⅰ型变态性疾病[10]。
从实验中可以发现,荨麻疹患者PBMC在体外培养加入PHA刺激条件下,产生IL-2的水平较正常组明显偏低(P<0.01),而IL-4的产生水平较正常组明显偏高(P<0.05);运用加味芍药甘草口服液治愈后,其水平趋于正常(P>0.05);在培养液中适量加入该药以后,与正常对照组亦无明显差异(P>0.05)。加味芍药甘草口服液在体内或体外培养条件下具有调节PBMC分泌 IL-2和 IL-4水平的作用,该药具有显著的临床疗效,其作用机理可能在于调节荨麻疹患者体内 PBMC的细胞因子分泌,进而达到治愈的目的。
【参考文献 】
［1 ］戴红，王威，于石成等.北京市城区居民脑卒中致残状况及对社区康复需求［J］.中国康复医学杂志，2000，15（6）：344～347.
［2］黄颖琼，叶俊英，王淑琼.脑卒中病人康复护理和早期肢体功能锻炼的疗效观察［J］.现代护理，2002，8（2）：137～138.
［3］袁峥.神经内科护理常规与临床技术操作工作手册［M］.北京：人民军医科技出版社，2006，597～600.
［4］饶明利.脑血管疾病［M］.北京：人民卫生出版社，2002，344～345.
［5］何其英.康复锻炼在脑卒中后肢体功能恢复中的作用［J］.中国临床康复，2002，6（15）：2319.
关键词:加味芍药甘草口服液;单一核细胞,外周血;白细胞介素-2;白细胞介素-4
中图分类号:R758.24 文献标识码:A文章编号:1671-4954(2010)04-238-03
doi:10.3969/j.issn.1671-4954.2010.04.002
Study on Mechanism of Paeoniae Add Glycyrrhizae Oral Liquid Plus in Treating Acute Urticaria
XU Yun2sheng,CHEN De2yu,OU Rong2ying
(Department of Dermatology,Southwest Hospi tal,Chongqing400038,China)
【Abstract 】 ObjectiveTo explore the mechanism of Paeoniae Add Glycyrrhizae Oral Liquid Plus in teating acute urticaria.MethodsMeans of EL ISA assay were used to observe the levels of IL-2 and IL-4 in 4 groups after 3 days culturing of the PBMC. The data were analysized by the Primer channel computer analysized system. Results The level of IL-2 producted by PBMC cultured in patients before treatment was distinctly lower(P <0.01)when compared with that of the cont rol group,while IL-4 was higher(P <0.05);In the patients cured with the oral liquid,the levels of IL-2 and IL-4 were normal(P >0.05);The levels were normal(P >0.05)when cultured with the medicine in patients before treatment .ConclusionOne of the most importtant mechanisms of the cure with the medicine in patients suffering from acute urticaria is that it can regulate the production of Interleukins poduced by Th1or Th2cells,such as IL-2,IL-4etc,so to eliminate allergic inflamation,and restore the immunologic function.
Key words :Paeoniae add glycyrrhizae oral liquid plus ;PBMC,IL-2;IL-4
加味芍药甘草口服液是一种新的抗过敏中成药,研究表明该药具有安全可靠、副作用少、作用快和愈后复发率低等特点,对急、慢性荨麻疹具有满意的疗效[1]。为进一步探讨其治疗作用机制,观察该药对急、慢性荨麻疹患者 PBMC 分泌 IL-2和 IL-4的影响作用,阐明其在该环节上的作用机制,特进行本实验。
材料和方法
1.1临床资料
病例均来源于泸州医学院附属医院皮肤科住院的急性荨麻疹患者,无其他合并症及用药史。治疗前选择30例,男19例,女11例,平均年龄7±6岁,进行两组实验;加味芍药甘草口服液治愈组选择30例,男17例,女13例,平均年龄35±7岁;对照组30例为正常人,男16例,女14例,平均年龄33±7岁。
1.2药物、试剂与仪器
加味芍药甘草口服液:泸医附院制剂室生产,批号9906;IL-2试剂盒和 IL-4试剂盒:由深圳晶美公司提供;HAN KS 液:泸医附院传染免疫研究室配制;Medium 1640 Powder :购自 GIBCO-BRL LABORATORIES,USA ;离心机、二氧化碳孵箱、倒置显微镜、超低湿冷冻冰箱以及酶标仪等由美国购进。
1.3实验方法
1.3.1PBMC体外培养 各组受检者于肘静脉采血2ml(治疗前患者采4ml,等分两份分别做第1、2组实验),以肝素200u 抗凝,密度梯度离心法分离 PBMC,用1640液1ml 重悬后接种到微孔板上,每孔加入植物血凝素(PHA)100μg,细胞浓度为1×106/ ml,治疗前第2组实验是再加入加味芍药甘草口服液,使其浓度达1%。于37℃、5%二氧化碳条件下孵箱内培养72h后取上清液冻存备测。
1.3.2PBMC 培养上清液中IL-2和 IL-4的水平检测严格按照 IL-2试剂盒和 IL-4试剂盒说明的步骤进行操作。
1.3.3结果判断 每个标准品和标本的 OD 值减去零孔的 OD值,以标准品浓度作横坐标,其 OD 值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点,根据标本的OD值,可在标准曲线上查出其浓度。
1.3.4统计学处理 实验结果用x±s 表示,凡进入统计的指标输入Primer软件作均数差异显著性t检验。
2结果
见表1。治疗前实验1组外周血单一核细胞体外培养 IL-2产生水平明显降低(t=2.872,P<0.01),而 IL-4产生水平明显升高(t =2.256,P<0.05)。治愈后的IL-2和IL-4在体外培养时产生水平趋于正常(t值分别为1.591、1.274,P>0.05)。治疗前实验2组外周血单一核细胞体外培养液中加入适量加味芍药甘草口服液,使 IL-2和 IL-4的产生水平趋于正常(t值分别为1.427、1.336,P>0.05)。
3讨论
在Ⅰ型变态反应中,细胞因子在发病机理中及疾病治愈转归过程中均起着重要的作用。IL-2系T淋巴细胞活化过程中由细胞膜所分泌的一种糖蛋白,主要由CD4+和CD8+T细胞产生,分子量为15.42Ku,是参与免疫应答的重要细胞因子,其产生水平变化能反映人体免疫功能的改变[2]。
有报道认为,急性发作期哮喘患儿 PBMC在PHA刺激下产生IL-2水平升高[3,4],其机制有待进一步探讨。符州等[5]的研究表明哮喘患儿 PBMC在PHA刺激下IL-2产生水平明显低于正常对照组。IL-4主要由CD4+T细胞产生,是B细胞生长和分化因子,具有促进 IgG向IgE的类型转换等多种生物学效应,在Ⅰ型变态反应中起重要作用。有报道,哮喘患者中,PBMC经PHA刺激,IL-4产生水平明显增高,增强了气道高反应性[6]。在慢性荨麻疹和季节性变应鼻炎患者中亦明显高于正常对照组[7,8]。
Th2类与 Th1类细胞数目及活性失衡[9],Th2类细胞因子水平显著增高,在Ⅰ型变态反应性疾病中已得到肯定。在细胞因子治疗方面,可通过阻断IL-4等Th2类细胞因子表达或拮抗其活性等途径,以调节两类细胞因子平衡,纠正体内免疫功能失常,消除变应性炎症,从而抑制甚至治愈 Ⅰ型变态性疾病[10]。
从实验中可以发现,荨麻疹患者PBMC在体外培养加入PHA刺激条件下,产生IL-2的水平较正常组明显偏低(P<0.01),而IL-4的产生水平较正常组明显偏高(P<0.05);运用加味芍药甘草口服液治愈后,其水平趋于正常(P>0.05);在培养液中适量加入该药以后,与正常对照组亦无明显差异(P>0.05)。加味芍药甘草口服液在体内或体外培养条件下具有调节PBMC分泌 IL-2和 IL-4水平的作用,该药具有显著的临床疗效,其作用机理可能在于调节荨麻疹患者体内 PBMC的细胞因子分泌,进而达到治愈的目的。
【参考文献 】
［1 ］戴红，王威，于石成等.北京市城区居民脑卒中致残状况及对社区康复需求［J］.中国康复医学杂志，2000，15（6）：344～347.
［2］黄颖琼，叶俊英，王淑琼.脑卒中病人康复护理和早期肢体功能锻炼的疗效观察［J］.现代护理，2002，8（2）：137～138.
［3］袁峥.神经内科护理常规与临床技术操作工作手册［M］.北京：人民军医科技出版社，2006，597～600.
［4］饶明利.脑血管疾病［M］.北京：人民卫生出版社，2002，344～345.
［5］何其英.康复锻炼在脑卒中后肢体功能恢复中的作用［J］.中国临床康复，2002，6（15）：2319.