【摘 要】
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为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体.利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGF
【机 构】
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复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系,教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室,上海200032
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为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体.利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGFP)作为外显肽,建立EGFPN1-8/EGFPC9-11和sfGFPN1-10/sfGFPC11蛋白分裂系统.基于 ΔHBc113载体,分别构建EGFPC9-11和sfGFPC11重组HBV复制子;应用DNA印迹法(Southern blotting)验证两种rHBV载体的细胞内复制能力.结果显示,构建的HBV1.1-ΔHBc113复制子载体能够在HBc反式互补条件下在转染细胞中形成病毒复制.构建的EGFPC9-11和sfGFPC11重组HBV复制子能够支持HBc互补条件下的细胞内病毒复制,并产生子代病毒颗粒;HBV重组复制子表达的EGFPC9-11或sfGFPC11蛋白在共表达氮端蛋白EGFPN/sfGFPN细胞中,通过intein介导的蛋白质高效拼接,能够形成完整的、有功能的GFP.结果表明,构建的荧光蛋白重组HBV复制子系统能够为HBV高通量药物筛选和HBV易感性研究提供实验工具,具有重要的病毒学意义和应用前景.
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