【摘 要】
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目的 探讨自噬基因Beclin 1在骨肉瘤发生、发展中的作用,并分析其过表达对人骨肉瘤细胞株MG63体外生长的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法对人成骨肉瘤细胞MG63及成骨细胞hFOB1.19中Beclin l mRNA及蛋白表达水平进行检测；构建表达融合蛋白的真核表达载体pEGFP/Beclin 1,并用脂质体转染人骨肉瘤细胞MG63.用MTT法分析外源性Becl
【机 构】
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目的 探讨自噬基因Beclin 1在骨肉瘤发生、发展中的作用,并分析其过表达对人骨肉瘤细胞株MG63体外生长的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法对人成骨肉瘤细胞MG63及成骨细胞hFOB1.19中Beclin l mRNA及蛋白表达水平进行检测；构建表达融合蛋白的真核表达载体pEGFP/Beclin 1,并用脂质体转染人骨肉瘤细胞MG63.用MTT法分析外源性Beclin 1过表达对MG63增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况.结果 人成骨肉瘤细胞MG63中Beclin 1mRNA及蛋白表达水平显著低于人成骨细胞hFOB1.19(0.17±0.06与0.43±0.11,t=29.493,P＜0.01;0.13±0.05与0.25±0.08,t=6.325,P＜0.01).pEGFP/Beclinl转染人成骨肉瘤细胞MG63后使其mRNA水平表达升高(5.34±0.50)倍,转染成功.正常培养的MG63细胞及空质粒转染的MG63细胞内,凋亡细胞很少,均为(0.10±0.05)％；而转染Beclin 1编码序列后凋亡细胞的比例明显升高,为(4.3±0.8)％,差异有统计学意义(t=5.752,P＜0.05).结论 Beclin1在骨肉瘤细胞中表达下降,可能与骨肉瘤的发生、发展密切相关,其过表达可抑制人成骨肉瘤细胞MG63的增殖并诱导其凋亡。
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