【摘 要】
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目的构建无凝血活性的重组小鼠凝血因子Ⅶ(rmFⅦ)毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得rmFⅦ蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础.方法 PCR 扩增得
【机 构】
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第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所
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目的构建无凝血活性的重组小鼠凝血因子Ⅶ(rmFⅦ)毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得rmFⅦ蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础.方法 PCR 扩增得到mFⅦ基因片段,插入酵母表达载体pPIC9K的α分泌信号开放阅读框的下游, 再经定点突变(K341A)得到pPIC9K-rmFⅦ,测序正确的质粒用Sac Ⅰ线性化后电穿孔转化毕赤酵母GS115,G418梯度筛选转化菌,PCR 鉴定目的基因的整合.结果获得了rmFⅦ毕赤酵母表达载体pPIC9K-rmFⅦ,G418 抗性筛选得到高拷贝
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