【摘 要】
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为了研究CRISPR/Cas9技术在天目地黄基因编辑中的应用,克隆了天目地黄(Rehmannia chingii)的八氢番茄红素脱氢酶基因(RcPDS1),利用PCR方法扩增其cDNA序列和基因组DNA序列。通过构建单靶点CRISPR/Cas9载体,利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法侵染天目地黄无菌苗叶盘,通过TA克隆测序法分析基因编辑的类型。结果显示,克隆获得了一个天目地黄RcPDS1的全长cDN
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81872950,81473299);
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为了研究CRISPR/Cas9技术在天目地黄基因编辑中的应用,克隆了天目地黄(Rehmannia chingii)的八氢番茄红素脱氢酶基因(RcPDS1),利用PCR方法扩增其cDNA序列和基因组DNA序列。通过构建单靶点CRISPR/Cas9载体,利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法侵染天目地黄无菌苗叶盘,通过TA克隆测序法分析基因编辑的类型。结果显示,克隆获得了一个天目地黄RcPDS1的全长cDNA序列,其具有1个长度为1 743 bp的开放阅读框,编码580个氨基酸残基,基因组DNA序列长度8 041 bp,包含14个内含子和15个外显子。通过遗传转化共获得57个转基因再生株系,其中具明显白化表型的株系有20个(35.09%)。TA克隆测序结果显示,RcPDS1靶位点突变类型主要包括碱基缺失、替换和插入。该结果说明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在天目地黄中成功实现了对RcPDS1基因的靶向敲除,为利用CRISPR/Cas9平台研究天目地黄基因的分子功能奠定基础。
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