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摘 要:目的:探讨血清miR-106b-3p和miR-214对食管鳞癌的诊断价值。方法:采用RT-qPCR技术检测ESCC患者和健康者血清中miR-106b-3p及miR-214的水平,结合临床病理资料,探讨它们之间的关系。结论:miR-106b-3p、miR-214在ESCC患者血清中升高,可作为新的肿瘤标志物协助ESCC的诊断。
关键词:食管鳞癌;血清;miR-106b-3p;miR-214;
微小RNA(microRNAs,miRNAs)是调节人类表观遗传的重要分子之一,广泛参与人类大多数癌症的分子调节过程[1]。研究发现,诸多miRNAs与食管癌的发生、发展有着密切联系。关于miRNA-106b-3p(miR-106b-3p)和miRNA-214(miR-214)在ESCC中的具体功能,目前较少报道。本研究采用RT-qPCR技术检测ESCC患者和健康者的血清中miR-106b-3p和miR-214表达水平,并结合临床病理资料,探讨它们与ESCC的关系。
材料和方法
1.研究对象
1.1 ESCC患者:取2016年07月至2016年12月邯郸市第一医院及苏州大学附属第一医院确诊的ESCC患者的外周血,共45例。其中男性26例,女性19例,年龄36~79岁,平均年龄61.2±11.1岁。每位患者均无其他肿瘤病史,采取外周血标本前及手术前均未行放疗、化疗、生物治疗等干预措施。
1.2健康体检者:收集40例同期健康体检志愿者的外周血,与ESCC患者在性别、年龄等情况无统计学差异(P>0.05),具有可比性。
2.主要试剂
Trizol试剂及逆转录试剂盒购于美国Invitrogen公司,PCR试剂盒购于德国Roche公司,引物由南京金斯瑞公司合成。
3.方法
3.1标本采集与处理
采集ESCC患者和健康体检者空腹静脉血3mL,静置40min,4℃3500×g离心10min,取上清液放入新的EP管中,放置-80℃冰箱中待用。
3.2血浆中总的RNA的提取
按说明书提取总RNA。测定总RNA纯度合格后用于后续实验。
3.3反转录反应
按照试剂盒说明进行反转录反应,将产物cDNA于-20℃保存备用。
3.4实时荧光定量PCR反应
以Roche公司的荧光定量PCR试剂盒来扩增目的基因,miRNA含量采用相对表达量2-△△Ct表示。
4.统计学处理
采用GraphPad5.0软件分析数据,多组间数据比较采用方差分析,两组间数据比较采用t检验,采用ROC曲线分析miR-106b-3p及miR-214对ESCC诊断价值,P<0.05表示有统计学差异。
结 果
1.食管鳞癌患者和健康体检者的血清miR-106b-3p、miR-214表達情况
在食管鳞癌患者术前的血清中miR-106b-3p、miR-214表达量分别为0.681±0.14及0.830±0.15,健康体检者的血清中miR-106b-3p、miR-214表达量为分别为0.20±0.03及0.27±0.05,两者与健康组相比存在显著差异,具有统计学意义。
2.miR-106b-3p及miR-214的表达与临床病理特征之间的关系
通过对临床及病理资料的分析,发现食管鳞癌患者血清miR-106b-3p及miR-214随着患者TNM分期增加及淋巴结转移而明显上调,差异有统计学意义(p<0.05),而与患者年龄、性别无关(p>0.05)。
3.血清miR-106b-3p和miR-214诊断食管鳞癌的价值
经过ROC曲线分析显示,术前血清miR-106b-3p相对表达量诊断食管鳞癌的最佳临界值为≤0.168,AUC为0.831,敏感性为74.8%、特异性为82.1%。术前血清miR-214相对表达量诊断食管鳞癌的最佳临界值为≤0.168,AUC为0.830,敏感性为76.9%、特异性为84.6%。
讨 论
miRNAs是一类非编码小分子RNA,miR-106b-3p是miR-106b的一种主要形式,李元梅等研究显示,miR-106b在甲状腺癌组织中的表达水平显著低于相应癌旁组织,提示其在甲状腺癌的发生发展中发挥抑癌基因作用[2],Liang等检测了肝癌患者组织标本,结果示miR-106b在肝癌组织明显上调,然而迄今为止,关于miR-106b-3p在ESCC中表达和功能的研究尚未有报道。本实验结果显示ESCC患者的血清miR-106b-3p表达水平明显高于健康者(P﹤0.01),和既往报道miR-106b的表达相似,说明miR-106b-3p可作为一个新的生物学标志,在临床上可通过检测血清miR-106b-3p来协助ESCC的诊断。
miR-214是 miRNAs 家族的重要成员,外周血miRNAs 受内源性RNA酶保护而不被降解,具有较好的特异性和稳定性,可稳定存在于血液、尿液等体液中[3]。Pang等发现,miR-214 在肝癌组织中表达下降,Yang 等研究显示,miR-214在胃癌组织及细胞中均升高。miR-214在ESCC的表达,卢琪珏的研究显示其在ESCC组织中的表达下降,认为miR-214在ESCC中为抑癌基因,而QIAO等研究发现是致癌基因。关于ESCC患者血清miR-214的表达情况,目前尚未见报道。本研究通过RT-qPCR 检测ESCC患者及健康人群血清miR-214 表达水平,发现ESCC患者的血清miR-214表达水平明显高于健康者(P﹤0.01),miR-214表达水平与ESCC分期及淋巴结转移情况有关,ROC曲线分析显示其可作为区分ESCC与健康者的分子标志物,因此,临床上miR-214可作为新的辅助诊断ESCC的血液肿瘤标志物。
总之,血清miR-106b-3p、miR-214在ESCC中上调,其表达水平反映了ESCC的进展情况,可作为ESCC新的肿瘤分子标志物及判断预后指标,对ESCC的临床诊治具有一定的应用价值。
参考文献:
[1] Rupaimoole R,Slack FJ.MicroRNA therapeutics:towards a new era for the management of cancer and other diseases.Nat Rev Drug Discov,2017,16(3):203-222.
[2] 李元梅,孙利敏,王媛媛,等.microRNA-106b在甲状腺癌中表达的临床意义及生物学功能[J].中华内分泌外科杂志,2017,11(1):60-64.
[3] Penna E,Orso F,Taverna D.MiR-214 as a key hub that controls cancer networks:small player,multiple functions [J].J Invest Dermatol,2015,135(4):960-969.
关键词:食管鳞癌;血清;miR-106b-3p;miR-214;
微小RNA(microRNAs,miRNAs)是调节人类表观遗传的重要分子之一,广泛参与人类大多数癌症的分子调节过程[1]。研究发现,诸多miRNAs与食管癌的发生、发展有着密切联系。关于miRNA-106b-3p(miR-106b-3p)和miRNA-214(miR-214)在ESCC中的具体功能,目前较少报道。本研究采用RT-qPCR技术检测ESCC患者和健康者的血清中miR-106b-3p和miR-214表达水平,并结合临床病理资料,探讨它们与ESCC的关系。
材料和方法
1.研究对象
1.1 ESCC患者:取2016年07月至2016年12月邯郸市第一医院及苏州大学附属第一医院确诊的ESCC患者的外周血,共45例。其中男性26例,女性19例,年龄36~79岁,平均年龄61.2±11.1岁。每位患者均无其他肿瘤病史,采取外周血标本前及手术前均未行放疗、化疗、生物治疗等干预措施。
1.2健康体检者:收集40例同期健康体检志愿者的外周血,与ESCC患者在性别、年龄等情况无统计学差异(P>0.05),具有可比性。
2.主要试剂
Trizol试剂及逆转录试剂盒购于美国Invitrogen公司,PCR试剂盒购于德国Roche公司,引物由南京金斯瑞公司合成。
3.方法
3.1标本采集与处理
采集ESCC患者和健康体检者空腹静脉血3mL,静置40min,4℃3500×g离心10min,取上清液放入新的EP管中,放置-80℃冰箱中待用。
3.2血浆中总的RNA的提取
按说明书提取总RNA。测定总RNA纯度合格后用于后续实验。
3.3反转录反应
按照试剂盒说明进行反转录反应,将产物cDNA于-20℃保存备用。
3.4实时荧光定量PCR反应
以Roche公司的荧光定量PCR试剂盒来扩增目的基因,miRNA含量采用相对表达量2-△△Ct表示。
4.统计学处理
采用GraphPad5.0软件分析数据,多组间数据比较采用方差分析,两组间数据比较采用t检验,采用ROC曲线分析miR-106b-3p及miR-214对ESCC诊断价值,P<0.05表示有统计学差异。
结 果
1.食管鳞癌患者和健康体检者的血清miR-106b-3p、miR-214表達情况
在食管鳞癌患者术前的血清中miR-106b-3p、miR-214表达量分别为0.681±0.14及0.830±0.15,健康体检者的血清中miR-106b-3p、miR-214表达量为分别为0.20±0.03及0.27±0.05,两者与健康组相比存在显著差异,具有统计学意义。
2.miR-106b-3p及miR-214的表达与临床病理特征之间的关系
通过对临床及病理资料的分析,发现食管鳞癌患者血清miR-106b-3p及miR-214随着患者TNM分期增加及淋巴结转移而明显上调,差异有统计学意义(p<0.05),而与患者年龄、性别无关(p>0.05)。
3.血清miR-106b-3p和miR-214诊断食管鳞癌的价值
经过ROC曲线分析显示,术前血清miR-106b-3p相对表达量诊断食管鳞癌的最佳临界值为≤0.168,AUC为0.831,敏感性为74.8%、特异性为82.1%。术前血清miR-214相对表达量诊断食管鳞癌的最佳临界值为≤0.168,AUC为0.830,敏感性为76.9%、特异性为84.6%。
讨 论
miRNAs是一类非编码小分子RNA,miR-106b-3p是miR-106b的一种主要形式,李元梅等研究显示,miR-106b在甲状腺癌组织中的表达水平显著低于相应癌旁组织,提示其在甲状腺癌的发生发展中发挥抑癌基因作用[2],Liang等检测了肝癌患者组织标本,结果示miR-106b在肝癌组织明显上调,然而迄今为止,关于miR-106b-3p在ESCC中表达和功能的研究尚未有报道。本实验结果显示ESCC患者的血清miR-106b-3p表达水平明显高于健康者(P﹤0.01),和既往报道miR-106b的表达相似,说明miR-106b-3p可作为一个新的生物学标志,在临床上可通过检测血清miR-106b-3p来协助ESCC的诊断。
miR-214是 miRNAs 家族的重要成员,外周血miRNAs 受内源性RNA酶保护而不被降解,具有较好的特异性和稳定性,可稳定存在于血液、尿液等体液中[3]。Pang等发现,miR-214 在肝癌组织中表达下降,Yang 等研究显示,miR-214在胃癌组织及细胞中均升高。miR-214在ESCC的表达,卢琪珏的研究显示其在ESCC组织中的表达下降,认为miR-214在ESCC中为抑癌基因,而QIAO等研究发现是致癌基因。关于ESCC患者血清miR-214的表达情况,目前尚未见报道。本研究通过RT-qPCR 检测ESCC患者及健康人群血清miR-214 表达水平,发现ESCC患者的血清miR-214表达水平明显高于健康者(P﹤0.01),miR-214表达水平与ESCC分期及淋巴结转移情况有关,ROC曲线分析显示其可作为区分ESCC与健康者的分子标志物,因此,临床上miR-214可作为新的辅助诊断ESCC的血液肿瘤标志物。
总之,血清miR-106b-3p、miR-214在ESCC中上调,其表达水平反映了ESCC的进展情况,可作为ESCC新的肿瘤分子标志物及判断预后指标,对ESCC的临床诊治具有一定的应用价值。
参考文献:
[1] Rupaimoole R,Slack FJ.MicroRNA therapeutics:towards a new era for the management of cancer and other diseases.Nat Rev Drug Discov,2017,16(3):203-222.
[2] 李元梅,孙利敏,王媛媛,等.microRNA-106b在甲状腺癌中表达的临床意义及生物学功能[J].中华内分泌外科杂志,2017,11(1):60-64.
[3] Penna E,Orso F,Taverna D.MiR-214 as a key hub that controls cancer networks:small player,multiple functions [J].J Invest Dermatol,2015,135(4):960-969.