稀有密码子影响人RNaseH-Apaf1融合蛋白原核表达

来源 :氨基酸和生物资源 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sean1221

【摘要】

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通过限制性内切酶克隆法构建两个pET-28a-TAT-RNaseH-Apaf1重组质粒,其中一个质粒经过稀有密码子的优化。将两个重组质粒分别转化原核表达宿主菌BL21(DE3)和Transetta(DE3),

【作者】

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兰泓孔劭凡李慎涛张玉祥

【机构】

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首都医科大学生物化学与分子生物学系,首都医科大学免疫学系

【出处】

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氨基酸和生物资源

【发表日期】

：

2015年4期

【关键词】

：

稀有密码子 RNaseH-Apaf1融合蛋白原核表达

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通过限制性内切酶克隆法构建两个pET-28a-TAT-RNaseH-Apaf1重组质粒,其中一个质粒经过稀有密码子的优化。将两个重组质粒分别转化原核表达宿主菌BL21(DE3)和Transetta(DE3),通过SDS-PAGE观察相应融合蛋白诱导表达的情况,并用His标签抗体和Apaf1抗体通过Western Blotting鉴定诱导蛋白。菌液PCR和测序证明经稀有密码子优化和未经稀有密码子优化的人源RNaseH-Apaf1序列成功重组到pET-28a-TAT载体中;经稀有密码子优化的重组质粒成功地在大

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