探讨内皮抑素预处理对人皮肤Fb纤维化的作用和相关机制。

将人皮肤Fb体外常规培养后，取第3～5代细胞进行实验。按照随机数字表法将细胞分为空白对照组、内皮抑素组、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)组、内皮抑素＋PDGF-BB组、TGF-β₁组、内皮抑素＋TGF-β₁组，每组3孔。空白对照组细胞仅用DMEM培养液培养24 h；内皮抑素组细胞用含5 μg/mL内皮抑素的DMEM培养液培养24 h；PDGF-BB组和TGF-β₁组细胞分别用含200 ng/mL PDGF-BB、10 ng/mL TGF-β₁的DMEM培养液培养24 h；内皮抑素＋PDGF-BB组细胞用含5 μg/mL内皮抑素的DMEM培养液预处理48 h后，再用含200 ng/mL PDGF-BB的DMEM培养液培养24 h；内皮抑素＋TGF-β₁组细胞用含5 μg/mL内皮抑素的DMEM培养液预处理48 h后，再用含10 ng/mL TGF-β₁的DMEM培养液培养24 h。每组收集3孔细胞的培养上清液，ELISA法检测Ⅰ型胶原含量；每组收集3孔细胞，采用蛋白质印迹法检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGF受体β(PDGFRβ)、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达。对数据行单因素方差分析、SNK检验。

(1)与空白对照组的(5.05±0.29)pg/mL比较，内皮抑素组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(4.72±0.37)pg/mL，二者相近(P>0.05)；PDGF-BB组和TGF-β₁组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量分别为(8.60±0.57)、(9.20±0.64)pg/mL，均显著升高(P值均小于0.05)。内皮抑素＋PDGF-BB组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(5.32±0.17)pg/mL，低于PDGF-BB组(P<0.05)；内皮抑素＋TGF-β₁组细胞培养上清液中Ⅰ型胶原含量为(5.41±0.20)pg/mL，低于TGF-β₁组(P<0.05)。(2)与空白对照组细胞α-SMA、PDGFRβ、p-PDGFRβ、p-ERK1/2蛋白表达量比较，内皮抑素组无明显差异(P值均大于0.05)，PDGF-BB组、TGF-β₁组均明显增加(P值均小于0.01)。内皮抑素＋PDGF-BB组、内皮抑素＋TGF-β₁组细胞α-SMA、PDGFRβ、p-PDGFRβ、p-ERK1/2蛋白表达量均分别低于PDGF-BB组、TGF-β₁组(P值均小于0.05)。

内皮抑素预处理可抑制人Fb纤维化和向肌Fb转化，这可能与内皮抑素下调p-PDGFRβ、PDGFRβ和p-ERK蛋白表达有关。