【摘 要】
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目的:验证在地衣芽胞杆菌ATCC9945A中存在着γ-聚谷氨酸降解酶基因(ywtD),为下一步解决在γ-聚谷氨酸微生物发酵合成过程中产物γ - PGA降解的技术性难题提供依据.方法:通过
【机 构】
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广东省微生物研究所,华南农业大学食品学院
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目的:验证在地衣芽胞杆菌ATCC9945A中存在着γ-聚谷氨酸降解酶基因(ywtD),为下一步解决在γ-聚谷氨酸微生物发酵合成过程中产物γ - PGA降解的技术性难题提供依据.方法:通过在pET -28b(+)大肠杆菌表达系统克隆表达地衣芽孢杆菌ATCC9945A中的ywtD基因,对诱导表达条件进行优化,采用SDS- PAGE和Western Blot方法检测目的蛋白的表达,并体外酶解实验验证其活性.结果:PCR扩增得到了一个1 245bp的基因片段,预期编码414个氨基酸,诱导表达后得到一个分子量大小约为45.6 kDa的表达产物.Western Blot分析结果表明ywtD基因得到了有效表达.体外酶解实验表明该表达产物具有降解γ - PGA的活性.结论:证明在地衣芽胞杆菌ATCC9945A中存在着γ-聚谷氨酸降解酶基因.
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