【摘 要】
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[目的]获得稳定表达重组人生长激素的中华仓鼠卵巢细胞株,并分析目的蛋白体内促动物生长活性及免疫原性。[方法]PCR扩增获得rh GH基因,构建重组表达质粒rh GH1-p Opti VEC,并
【基金项目】
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安徽省高校自然科学研究重点项目（KJ2017A935）,安徽省高校自然科学研究一般项目（KJ2010B169）
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[目的]获得稳定表达重组人生长激素的中华仓鼠卵巢细胞株,并分析目的蛋白体内促动物生长活性及免疫原性。[方法]PCR扩增获得rh GH基因,构建重组表达质粒rh GH1-p Opti VEC,并进行双酶切及测序鉴定。脂质体法转染CHO/DG44 dhfr-细胞,利用SDS-PAGE电泳及Western blot检测目的蛋白,并用氨甲喋呤(MTX)加压筛选阳性克隆。采用Co2+亲和层析法纯化rh GH。促去垂体家兔生长法检测rh GH体内活性,同时采用ELISA双抗夹心法检测重组蛋白诱生抗体滴度,分析其免疫原性。[结果]PCR扩增得到696 bp的rh GH序列,双酶切及测序结果显示构建的rh GH1-p Opti VEC质粒正确。转染细胞后,MTX加压使得蛋白表达量明显提高。纯化的rh GH能够促进去垂体家兔体重增加。诱生抗体滴度分析结果显示该蛋白具有与市售商品化蛋白相似的免疫原性。[结论]真核表达rh GH蛋白能够促进动物生长,可用于相关药物研究。
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