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目的
分析肝癌患者肿瘤免疫微环境变化及相关机制。
方法纳入2015年1月至2017年12月山西大医院肝细胞癌、乙型肝炎、健康志愿者各10例。检测各组外周和局部粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平。流式细胞术和免疫组化检测肝癌、肿瘤边缘和正常肝组织的髓来源的抑制性细胞(MDSCs),免疫组化检测GM-CSF通路相关蛋白表达。筛选合适肝癌细胞系后,细胞转染CCR4-NOT转录复合体亚基7(CNOT7)重组质粒,随后检测信号传导及转录活化因子(STAT)等相关蛋白表达。
结果肝癌组、肝炎组、对照组外周血GM-CSF水平差异无统计学意义(P>0.05)。局部GM-CSF水平,肿瘤边缘为(32.2±8.9)ng/L,高于肝癌组织的(9.7±2.7)ng/L和正常肝组织的(11.6±2.9)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤边缘MDSCs比例为(9.9±3.6)%,高于肝癌组织的(4.0±1.5)%和正常肝组织的(6.3±2.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化得到相似结果。与正常肝组织比较,肝癌组织CNOT7、STAT3高表达,而STAT1低表达。筛选出HepG2人肝癌细胞进行转染。与空质粒组比较,敲除组CNOT7敲除成功,表达下调,STAT1表达增加,STAT3表达减少,GM-CSF表达明显降低(P<0.05)。
结论肝细胞癌患者肿瘤边缘组织GM-CSF分泌增加,MDSCs增多。肝癌细胞HepG2敲除CNOT7,通过激活JAK/STAT信号通路,减少GM-CSF分泌。