【摘 要】
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目的 构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础.方法 用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDN
【机 构】
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上海师范大学生命与环境科学学院,中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室
【基金项目】
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科技部科技基础条件平台建设计划;上海市科委资助项目
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目的 构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础.方法 用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA 末端加上定向EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端.用Mini Column纯化,收集300 bp以上的双链cDNA 片段,再连接于带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.结果 经测定,库容量为1.5×106 pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012 pfu/ml.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200～1500 bp,其中有90%的插入片段＞300 bp.结论 成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库.
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