目的 建立嗜水气单胞菌TaqMan实时PCR实验室检测方法.方法 根据嗜水气单胞菌主要黏附素基因(aeromonas hydrophila major adhesion gene,ahe)的保守序列设计引物和TaqMan探针.引物选取200～700 nmol/L 6个浓度梯度,探针选取100～400 nmol/L 4个浓度梯度,以完全随机设计资料的方差分析分别优化引物和探针的浓度.以45株霍乱弧菌、20株副溶血弧菌、10株河流弧菌、4株拟态弧菌、5株创伤弧菌、1株溶藻弧菌、1株弗尼斯弧菌、5株沙门菌属细菌、10株志贺菌属细菌和2株类志贺邻单胞菌为对照,评价该方法的特异性.对所建立的方法进行菌液灵敏度检测和DNA灵敏度检测,并将嗜水气单胞菌人工污染健康人的粪便,实验室内评价该方法从粪便中检测嗜水气单胞菌的能力.结果 6组引物浓度所得的循环阈值(cycle threshold,Ct)分别为(x±s):20.69±0.33、20.72±0.21、20.81±0.12、20.74±0.12、20.51±0.16和20.69±0.11,选择上下游引物的浓度为200 nmol/L(F=1.33,P=0.28),4组探针浓度所得的Ct值分别为(x±s):20.56±0.08、20.82±0.05、20.82±0.11和20.9±0.09,选择探针的浓度为100 nmol/L(F=5.26,P=0.01).该方法DNA的榆测下限为100 fs/μl,纯菌液的检测下限为80 CFU/ml,粪便中嗜水气单胞菌的检测下限为8×103CFU/ml,人工粪便标本增菌8 h后的检测下限为8 CFU/ml.该方法对其他细菌的染色体无扩增.结论 以aha基因为目标检测片段建立的嗜水气单胞菌实时PCR方法灵敏度高、特异度强,可用于纯菌和粪便标本中嗜水气单胞菌的快速检测。