【摘 要】
：
目的 利用噬菌体随机肽库技术获得与人Fas胞外区结合的多肽及其多肽基序,观察多肽基序的生物学功能. 方法以人Fas胞外区与IgG Fc段的融合蛋白Fas.Fc为筛选配基,筛选噬菌体随机九肽库;微量淘洗与ELISA相结合鉴定阳性克隆,DNA测序和分析.化学合成多肽进行竞争性ELISA以及细胞增殖抑制实验. 结果经过4轮亲和筛选,微量淘洗鉴定,获得42个阳性克隆;固定ELISA实验显示筛选到的噬菌体短
【机 构】
：
400038,重庆,第三军医大学免疫学教研室,400038,重庆,第三军医大学免疫学教研室,400038,重庆,第三军医大学免疫学教研室,400038,重庆,第三军医大学免疫学教研室,400038,重
论文部分内容阅读
目的 利用噬菌体随机肽库技术获得与人Fas胞外区结合的多肽及其多肽基序,观察多肽基序的生物学功能. 方法以人Fas胞外区与IgG Fc段的融合蛋白Fas.Fc为筛选配基,筛选噬菌体随机九肽库;微量淘洗与ELISA相结合鉴定阳性克隆,DNA测序和分析.化学合成多肽进行竞争性ELISA以及细胞增殖抑制实验. 结果经过4轮亲和筛选,微量淘洗鉴定,获得42个阳性克隆;固定ELISA实验显示筛选到的噬菌体短肽能与Fas.Fc特异性结合,并呈剂量依赖关系;随机选取13个阳性克隆进行DNA测序,其序列及出现几率分别为:PRKARVDTS(2/13)、YKKKSLQVQ(2/13)、YKKKSMLQA(2/13)、SRKKYDQYA(4/13)、YARKIKPTA(2/13)和ARKKTEGAG(1/13).经多重序列分析,获得多肽基序:*R/KKK****A.在ELISA和竞争性ELISA实验中,化学合成多肽EGEFYKKKSMLQADPAK (P3)可抑制Fas与抗人Fas单抗Apo-1的结合,且呈剂量效应关系;P3不能抑制Fas与FasL的结合.细胞增殖实验表明,多肽可抑制Jurkat细胞增殖,且随多肽剂量的增加而加强.多肽与单抗Apo-1联合作用对Jurkat细胞增殖的影响与单独使用P3没有明显差别. 结论通过噬菌体随机肽库技术获得与Fas结合的多肽及其多肽基序,它们可能模拟了抗Fas抗体Apo-1对Fas的结合位点,为基于Fas凋亡的多肽药物前体设计提供了实验依据和结构基础。
其他文献
目的研究新生儿时期分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞数量的变化及细菌脂多糖(LPS)刺激的变化特点.方法采用96孔微板进行末梢全血的酶联免疫斑点(ELISPOT)检测TNF-α分泌细胞
黄花倒水莲(Polygala aureocauda Dunn.)为一民间草药,系远志属多年生小灌木,主要分布在湖南、福建、广东和广西等地,有补益、强壮、散瘀之功效,主治虚弱虚肿、急慢性肝炎、
目的 总结急性肾下腹主动脉闭塞的诊治经验.方法对18年间收治的34例急性肾下腹主动脉闭塞进行回顾性分析.5例采用术中红血球清洗回输(cell saver)治疗.结果全组死亡12/34例(35.3%),术后急性肾功能衰竭、代谢性酸中毒高血钾是死亡的主要原因.5例应用cell saver治疗者均无急性肾功能衰竭和代谢性酸中毒高血钾症发生.痊愈者肢体保全36/44条(81.8%). 结论及时诊断、正确选
目的 研究CRTH2在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T淋巴细胞亚群的表达及其意义. 方法收集ITP患儿及健康儿童外周抗凝静脉血,分离纯化T细胞,以PE标记的抗CRTH2单抗和Cy5标记的抗CD4、CD8单抗作双色流式细胞术,分析CRTH2在ITP患儿CD4+、CD8+ T细胞表达的水平. 结果 ITP患儿外周血T细胞与健康儿童相比,CD4+细胞百分率及CD4+/CD8+比例明显下降(P
人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强免疫力等多种生物学活性.人参皂甙是人参中主要的活性有效成分.我们曾发现人参总皂甙在体外能诱导人肝癌细胞株HepG2分化[1,2],最近又发现人参皂甙单体Rh2(G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用.G-Rh2诱导SMMC-7721细胞分化过程中,癌细胞的信号传导系统必然会发生改变.通过研究G-Rh2对糖皮质激素受体(GR)、受体型酪氨酸激酶
患儿 ,女 ,6岁。主因吃口香糖时呛咳后咳喘3h于 2 0 0 2年 1 2月 7日入院。体检 :体温 37.6℃ ,双肺呼吸音粗 ,左下侧呼吸音明显减低 ,心腹 ( - )。胸部透视见纵隔摆动 ,左肺
目的 探讨肾移植术中常规应用连接式单J管输尿管支架 ,以降低肾移植术后输尿管的并发症发生率。方法 回顾性分析 15 6例肾移植术中常规应用连接式单J管的临床资料。前期 76
目的 探讨心肌超声造影评判心肌顿抑的可能性和价值.方法结扎犬左前降支冠状动脉不同时间(15、60 min)后再灌注120 min,在不同观察时间点静脉注射含全氟丙烷声振白蛋白微泡造影剂,采用二次谐波成像和间歇发射技术行心肌超声造影,以心肌视频密度峰值表示心肌血流灌注,顿抑区与正常区视频密度峰值比值表示顿抑区相对血流灌注.每次心肌超声造影后,用超声诊断仪测得心肌节段室壁厚度,计算室壁节段收缩期增厚百
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义脱氧寡核苷酸(AODN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,并探讨其作用机制.方法利用脂质体分别将浓度为5μmol/L的bFGF反义、正义及随机寡核苷酸(ODN)导入体外培养的VSMCs;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot半定量测定方法,观测ODN对bFGF基因表达的影响;通过细胞活性测定观察ODN对VSMCs增
随着医学科学的发展,医学高新技术伴随其发展也应运而生了,而后者在其发展和应用中,不仅改变了人类的生活内容和生活方式,也改变了人与人之间的伦理道德关系.因此,在医院内部、医院和社会病人之间产生了一些新的伦理道德问题,如何面对这些问题并遵循相应的伦理学原则呢?本文对此进行粗浅的论述。