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为建立铁皮石斛的SCoT-PCR反应体系,本研究以8个不同增殖代的铁皮石斛组培苗为试验材料,采用正交试验设计,对影响PCR反应体系的2xTaq Master Mix混合液、引物、模板DNA的浓度进行优化,建立了铁皮石斛SCoT-PCR的最佳反应体系,筛选引物,并对1～8代的组培苗进行遗传稳定性鉴定.结果表明:铁皮石斛的SCoT-PCR最佳反应体系(20 μL)包含2xTaq Master Mix 10 μL、引物0.50 μmol/L、模板DNA 40 ng;从60条引物中筛选出19条扩增结果稳定、条带清晰的SCoT引物;所有引物在8个增殖代的16份供试材料中均能扩增出清晰、丰富而稳定的条带,但是所得条带的数量和大小一致,均没有多态性,即16份材料没有发生遗传变异.反应体系的建立可为铁皮石斛种质资源鉴定和遗传多样性研究提供参考,也为其他药用植物组培苗遗传稳定研究提供理论和方法借鉴.