为制备犬瘟热病毒（CDV）H蛋白单克隆抗体，采用蔗糖密度梯度离心法提纯CDV-Ondetstepoort株，利用RT-PCR方法扩增其H基因截短片段(H₁、H₂、H₃)，克隆至pET-28a（+）载体并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行原核表达，用Ni-NTA亲和层析柱纯化3种截短H蛋白；以纯化病毒为抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接ELISA、间接免疫荧光法（IFA）和病毒中和试验分析杂交瘤细胞的生物学特性。结果表明，纯化的截短H蛋白表达正确，以此筛选到7株能稳定分泌犬瘟热病毒和重组H₂蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株（3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2），抗体亚类鉴定均为IgG1κ；IFA检测均为阳性，表明7种单克隆抗体特异性好；病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为2⁴～2⁸，诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为10²～10⁶；间接ELISA叠加试验显示，3B5、4G12、5A6、7B2之间的叠加系数均在50%以上，表明这4种单克隆抗体识别不同抗原表位；另外，3B5、4G12、5A6、7B2还能中和当前流行的Asia-1型CDV毒株，具有较好的广谱中和活性。本研究为后续CDV感染的免疫治疗和CDV检测方法的建立提供了材料基础。