目的 检测吉西他滨(gemcitabine,GEM)诱导胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化诱导静止基因(TMS1/ASC)的表达,并探讨半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)、核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)的活性与TMS1/ASC之间的关系.方法 用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测GEM在不同浓度(1、2、4、8、16 μg/ml)及不同时间(24、48 h)下对胰腺癌细胞PANC-1存活率的影响;RT-PCR技术检测PANC-1细胞在GEM(4.27 ∴g/ml)刺激组(实验组)和空白组(对照组)培养24h和48 h后TMSl/ASC mRNA的表达情况.用抗κB抑制蛋白(inhibitory protein of NF-κB,I κBα)多克隆抗体、抗easpase-1多克隆抗体和内参β-actin单克隆抗体通过Western blot技术检测并比较IκBα和caspase-1在实验组和对照组中的蛋白表达水平,从而分析NF-κB和caspase-1的活化状态.结果 GEM对PANC-1细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率(IC50)为24h4.27 μg/ml;24 h时实验组和对照组TMS1/ASC的表达量分别为(0.3±0.004)和(0.1±0.001),48 h实验组和对照组分别为(0.63±0.007)和(0.21 ±0.006),2组相比较,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot结果显示:随着培养时间延长,caspase-1在对照组中未发生活化,GEM可促进其活化;GEM实验组与对照组相比IκBα的表达量无明显变化,GEM不能促使NF-κB活化.结论 GEM能抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖并促进凋亡,随着作用时间的延长其药物敏感性减低.GEM作用一定时间可诱导TMS1/ASC表达增加,caspase-1可能参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC-1 凋亡的信号转导途径,NF-κB不参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的信号转导途径。
吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中甲基化诱导静止基因的表达与半胱氨酸天冬氨酸酶-1、核转录因子活性的研究
【摘 要】
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目的 检测吉西他滨(gemcitabine,GEM)诱导胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化诱导静止基因(TMS1/ASC)的表达,并探讨半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)、核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)的活性与TMS1/ASC之间的关系.方法 用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色
【机 构】
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435000湖北省黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)检验科、肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室,435000湖北省黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)检验科、肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室,
【出 处】
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中华内分泌外科杂志
【发表日期】
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2013年7期
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