【摘 要】
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目的:明确miR-296-5p在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）db/db小鼠血浆外泌体中的表达并初探其在转录因子Snail1介导的上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法:先后采集12只12周龄db/db小鼠（模型组）和12只12周龄db/m小鼠（对照组）血浆,提取外泌体RNA进行测序,利用生物信息学
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金（81804027）;国家自然科学基金面上项目（81774117）；
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目的:明确miR-296-5p在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）db/db小鼠血浆外泌体中的表达并初探其在转录因子Snail1介导的上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法:先后采集12只12周龄db/db小鼠（模型组）和12只12周龄db/m小鼠（对照组）血浆,提取外泌体RNA进行测序,利用生物信息学软件筛选靶向Snail1的差异miRNA;利用透视电镜、纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体;并通过小鼠肾组织及血浆外泌体验证获得目标miRNA,双荧光素酶实验明确其与Snail1的靶向关系,RT-qPCR和免疫组化检测db/db小鼠和db/m小鼠肾组织中Snail1、钙黏附蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）基因和蛋白的表达。结果:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体及肾组织中表达下调（P=0.011,P=0.001）;双荧光素酶实验证实miR-296-5p与Snail1的靶向关系;db/db小鼠肾组织中Snail1 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.001,P=0.005）,E-cadherin mRNA和蛋白表达降低（P=0.012,P=0.020）,α-SMA m RNA表达增加（P=0.042）。结论:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体中低表达,进而可能通过血浆外泌体递送,靶向上调肾小管上皮细胞Snail1,诱导肾小管上皮细胞EMT,加速DN肾间质纤维化。
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