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目的 观察体外高磷培养条件下,血管平滑肌细胞(VSMC)向类似成骨样细胞转分化的动态变化特点.方法 Western印迹和免疫荧光法观察不同磷浓度(1.0、2.5、3.5mmol/L)培养条件下,人VSMC的标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及成骨细胞特异性的核转录因子Cbfct1、相关骨基质蛋白(骨桥蛋白、Ⅰ型胶原和骨钙素)的动态变化过程.实时荧光定量PCR法分析上述指标的基因表达水平.在此基础上,以硝酸银染色和茜素红染色了解细胞的钙盐沉积状况,最后通过电镜观察不同培养条件下细胞超微结构的改变.结果 在无血清的培养条件下,高磷(2.5、3.5 mmol/L)刺激细胞12 h时,胞内Cbfα1的表达就明显增加(P<0.05);3 d后高磷组(2.5、3.5 mmol/L)细胞中Ⅰ型胶原和骨桥蛋白的含量显著上调(均P<0.05);第6天骨钙素的产生开始增加;15 d时高磷组(2.5、3.5 mmol/L)α-SMA的含量才显著下降(P<0.05).实时荧光定量PCR结果显示,高磷环境培养1 d时,细胞中骨桥蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA水平显著升高(均P<0.05);5 d时骨钙素的mRNA表达显著增加(P<0.05);10 d时α-SMA的mRNA含量显著减少(P<0.05).在高磷营养液中培养15 d时,细胞出现多处斑片状的钙盐沉积.电镜可见胞质内产生大量胶原纤维和钙化的基质囊泡.结论 高磷可诱导VSMC向类似成骨样细胞转分化,这是一个复杂的、有多个环节、有序的动态变化过程。