【摘 要】
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目的 探讨力学刺激与淫羊藿苷(ICA)耦合作用对疲劳载荷下破骨细胞分化的影响及可能存在的分子机制.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,空白对照组为 α-MEM完全培养基
【机 构】
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300193,天津中医药大学第一附属医院推拿科军事科学院系统工程研究院卫勤保障技术研究所, 天津,300161;中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所, 天津,300192;
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目的 探讨力学刺激与淫羊藿苷(ICA)耦合作用对疲劳载荷下破骨细胞分化的影响及可能存在的分子机制.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,空白对照组为 α-MEM完全培养基;疲劳载荷下破骨细胞模型组更换为破骨细胞培养液(含质量浓度为40 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子和40 ng/ml破骨细胞分化因子的 α-MEM完全培养基),并对RAW264.7细胞施加5000με 基底拉伸应变;力学刺激+ICA组经上述细胞因子和高应变(5000με)刺激后,更换为含有1×10-5 mol/L ICA的 α-MEM完全培养基,并施加1000με 基底拉伸应变.采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒检测破骨细胞中TRAP的活性变化;实时定量PCR检测破骨细胞标志性基因TRAP、组织蛋白酶K(CTSK)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western Blot)分析核因子 κB(NF-κB)异位情况.结果 与模型组相比,力学刺激(1000με的基底拉伸)和ICA(1×10-5 mol/L)耦合作用能显著抑制破骨细胞中TRAP的活性(P<0.01),减少破骨细胞的形成;显著下调标志性基因TRAP、CTSK和MMP-9的mRNA表达,差异均具有统计学意义(均P<0.01);通过抑制NF-κB信号通路中P65、P50、NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)的磷酸化来抑制破骨细胞的生成.结论 力学刺激与ICA耦合作用可有效抑制疲劳载荷下破骨细胞的分化及其骨吸收功能,其作用机制可能是通过调节NF-κB信号通路来实现.
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