【摘 要】
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目的建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)定量检测方法,用于重组人干扰素α-2b中残余宿主菌菌体蛋白(HCP)含量的检测。方法采用带有不含干扰素基因空质
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目的建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)定量检测方法,用于重组人干扰素α-2b中残余宿主菌菌体蛋白(HCP)含量的检测。方法采用带有不含干扰素基因空质粒的假单胞菌,按既定工艺发酵纯化并制备HCP,免疫小鼠和白兔后制备抗HCP多抗体,以抗HCP兔抗体为包被抗体,将抗HCP鼠抗体标记辣根过氧化物酶(HRP)为酶联抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法线性范围为2.5~80.0 ng/m L,相关系数R2>0.98,定量限为2.5 ng/m L;检测不同浓度的加样回收样品,回收率为85%~115%,变异系数均<10%;与重组人干扰素α-2b和牛血清白蛋白(BSA)均无交叉反应;检测3批供试品,准确度及重现性良好。结论已建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,专属性强,灵敏度高,准确度和精密度较高,可用于重组人干扰素α-2b中HCP的质量控制。
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