【摘 要】
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极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)是细胞周期有丝分裂调节蛋白激酶之一,参与调控生殖细胞的发生和成熟.研究表明AURKA是雄激素受体(androgen receptor,AR)的靶基因,双氢睾酮
【机 构】
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甘肃农业大学生命科学技术学院,兰州730070甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学生命科学技术学院,兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学动物科学技
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极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)是细胞周期有丝分裂调节蛋白激酶之一,参与调控生殖细胞的发生和成熟.研究表明AURKA是雄激素受体(androgen receptor,AR)的靶基因,双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)与胞内AR结合后促进精子成熟.因此,探究AURKA与DHT的作用机制对雄性动物生殖及相关疾病的研究有重要意义,但其具体作用及机制尚不完全清楚.本研究采集8周龄昆明雄性小鼠(Mus musculus)下丘脑、垂体和睾丸组织生殖轴器官组织,通过半定量PCR、免疫印迹(Western blot,WB)、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)和免疫组化学染色(immunohistochemistry,IHC),探究AURKA在雄性小鼠性腺轴的表达规律及定位.设计AURKA-siRNA干扰序列,转染原代成年小鼠睾丸支持细胞,利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和WB检测转染24 h后,细胞AURKA和5α-还原酶1(5α-reductase type 1,SRD5A1)基因和蛋白表达变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析AURKA-siRNA干扰睾丸支持细胞对DHT含量的变化.结果表明,雄性小鼠性腺轴器官的组织中AURKA基因和蛋白均有表达,且睾丸组织中其表达量极显著高于下丘脑和垂体(P<0.01);睾丸支持细胞及精子中AURKA蛋白阳性反应最强;AURKA-siRNA干扰小鼠支持细胞24 h后,AURKA基因和蛋白的表达明显下调(P<0.05),而SRD5A1基因和蛋白表达显著上调(P<0.05)且DHT的含量显著增加(P<0.05).说明AURKA负反馈调控SRD5A1表达促进DHT合成,本研究为雄性动物生殖过程中AURKA功能研究提供参考依据.
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