【摘 要】
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目的构建过表达人泛素交联酶UBE2D3基因的稳定转染食管癌EC109细胞株，并观察过表达后迁移增殖能力及对顺铂化疗敏感性的改变。方法食管癌EC109细胞株分别转染pEGFP-C1和pEGFP-UBE2D3质粒后，分为阴性对照组(NC组)和过表达组(OE组)，并用G418进行筛选构建稳定转染细胞株。通过实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blotting验证过表达效率，用划痕试验检测迁
【机 构】
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430071 武汉大学中南医院肿瘤放化疗科 国家临床重点专科 肿瘤生物学行为湖北省重点实验室 湖北省肿瘤医学临床研究中心,430071 武汉大学中南医院肿瘤放化疗科 国家临床重点专科 肿瘤生物学行为湖
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目的构建过表达人泛素交联酶UBE2D3基因的稳定转染食管癌EC109细胞株，并观察过表达后迁移增殖能力及对顺铂化疗敏感性的改变。
方法食管癌EC109细胞株分别转染pEGFP-C1和pEGFP-UBE2D3质粒后，分为阴性对照组(NC组)和过表达组(OE组)，并用G418进行筛选构建稳定转染细胞株。通过实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blotting验证过表达效率，用划痕试验检测迁移能力，并用CCK-8法检测细胞增殖，半抑制浓度(IC50)法评价对顺铂的敏感性。
结果相对于亲本细胞，NC组UBE2D3 mRNA表达量为1.010±0.590，OE组为2.026±0.898；NC组UBE2D3蛋白表达量为0.923±0.237，OE组为1.520±0.487；NC组UBE2D3 mRNA及蛋白表达水平与空白对照组亲本细胞EC109相近(t＝1.005，P>0.05；t＝1.492，P>0.05)，OE组较亲本细胞组表达高(t＝6.682，P<0.05；t＝9.150，P<0.05)。在12 h NC组的迁移距离为(0.161±0.062)mm，OE组为(0.052±0.007)mm (t＝4.370，P<0.05)；在24 h NC组的迁移距离为(0.309±0.071)mm，OE组为(0.074±0.012)mm (t＝3.644，P<0.05)；在12 h和24 h时OE组相对于NC组的迁移率分别为0.236±0.051和0.241±0.037，OE组迁移能力明显较NC组降低；在第1天时OE组相对于NC组的增殖率为0.713±0.220(t＝13.466，P<0.05)，第2天为0.848±0.241(t＝27.241，P<0.05)，第3天为0.742±0.233 (t＝15.107, P<0.05)。使用顺铂处理后，在第1天时OE组的IC50值相对于NC组为0.356±0.154(t＝4.326，P<0.05)，第2天为0.445±0.098(t＝5.870，P<0.05)，第3天为0.481±0.096 (t＝5.009，P<0.05)，OE组IC50值明显低于NC组；给予5 μg/ml顺铂处理后，在第1、2、3天时OE和NC组相对于未使用顺铂处理时的增殖效率均减慢，其中OE组相对于NC组的增殖率分别为0.606±0.283(t＝8.872，P<0.05)、0.759±0.089(t＝16.771，P<0.05)和0.569±0.574(t＝7.885，P<0.05)，然而在第1、2、3天时OE组的存活率相对于NC组分别为0.831±0.323(t＝24.226，P<0.05)、0.875±0.102(t＝33.541，P<0.05)和0.853±0.359(t＝28.187，P<0.05)，顺铂对OE组抑制效率较NC组增加。
结论食管癌细胞EC109中过表达UBE2D3基因，能够抑制其迁移、增殖，增强其对顺铂的敏感性。
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