探讨氮杂胞苷对射线诱导大鼠Ⅱ型肺上皮细胞系(RLE-6TN)上皮间质转换的影响,并探究其发生机制,为放射性肺纤维化提供潜在的药物治疗实验依据。
方法体外培养RLE-6TN细胞根据实验目的分为对照组(C)、照射组(R)、氮杂胞苷组(A)、照射加氮杂胞苷组(R + A)。细胞超微结构改变采用透视电子显微镜鉴定,细胞形态学改变采用倒置相差显微镜观察。运用实时荧光定量RT-PCR检测E-cadherin和α-SMA在mRNA水平的表达,运用蛋白印迹法检测E-cadherin、GSK3β、p-GSK3β(ser9)在蛋白水平的表达。单因素方差分析组间差异。
结果R组细胞形态趋于纺锤形,而R + A变化不明显。R组嗜锇性板层小体最终消失。RT-PCR提示在mRNA水平R组相对C组E-cadherin表达减少[(0.23 ± 0.06): (1.00 ±0.00),P = 0. 002]、α-SMA表达增多[(2.91 ±0.01) :(1.00 ±0.00),P=0.000],而R + A组相对R组E-cadherin表达增加[(0.47 ± 0. 05 ) :(1.00 ± 0.00) ,P=0. 024]、α-SMA表达减少[(2.50 ± 0. 02) :(1.00 ± 0. 00),P = 0. 037) ] 。蛋白印迹法结果显示R组相对C组E-cadherin在蛋白水平表达下调[(0.07 ± 0.01) :(0.48 ± 0. 02), P = 0. 028 ]、p-GSK3β表达上调[(0. 85 ±0. 04) :(0.23 ±0. 03),P = 0. 031 ],而R + A组相对R组E-cadherin表达下降[(0.25 ±0. 00):(0.07 ±0.01), P=0. 024) ]、p-GSK3β表达上调程度明显减少[(0. 39 ± 0. 03):(0.85±0.04),P=0.014]。
结论X射线可引起上皮细胞上皮间质转换,而氮杂胞苷通过抑制p-GSK3β活性来抑制放射诱导的RLE-6TN细胞上皮间质转换的发展。