【摘 要】
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目的 利用穿梭质粒通过同源重组构建表达SARS-CoV-2 RBDEPI蛋白重组痘苗病毒，并对其进行筛选、鉴定和免疫原性检测。方法 参照SARS-CoV-2全基因组序列设计合成目的基因RBDEPI,通过PCR、测序、酶切连接将目的基因插入到痘苗病毒穿梭载体pSTKE中，构建pSTKE-RBDEP。将pSTKE-RBDEPI与天坛株痘苗病毒VTT共转染鼠肾细胞BHK-21中，通过同源重组，并以增强型
【基金项目】
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2021年长春市科技发展计划项目创新平台与人才计划青年科技人才创新创业专项（No.21QC01）； 吉林省教育厅科学技术研究项目（No.JJKH20220887KJ）； 2022年度吉林省中医药科技项目（No.2022133）； 2022年度省科技发展计划项目（No.20220508075RC）；
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目的 利用穿梭质粒通过同源重组构建表达SARS-CoV-2 RBDEPI蛋白重组痘苗病毒，并对其进行筛选、鉴定和免疫原性检测。方法 参照SARS-CoV-2全基因组序列设计合成目的基因RBDEPI,通过PCR、测序、酶切连接将目的基因插入到痘苗病毒穿梭载体pSTKE中，构建pSTKE-RBDEP。将pSTKE-RBDEPI与天坛株痘苗病毒VTT共转染鼠肾细胞BHK-21中，通过同源重组，并以增强型绿色荧光蛋白EGFP为筛选标记，通过多次绿色荧光噬斑筛选获得重组病毒rVTT△TK-RBDEPI。利用RT-PCR和Western blot检测rVTT△TK-RBDEPI目的基因的转录和目的蛋白的表达情况；通过ELISA和ELISPOT检测rVTT△TK-RBDEPI免疫小鼠SARS-CoV-2与痘苗病毒载体特异性抗体水平和特异性淋巴细胞IL-4与IFN-γ的表达情况，确定rVTT△TK-RBDEPI的免疫原性。结果 经过10次绿色荧光噬斑筛选、RT-PCR与Western blot鉴定获得1株能够表达SARS-CoV-2 RBDEPI的重组痘苗病毒rVTT△TK-RBDEPI,且rVTT△TK-RBDEPI具备良好的免疫原性。结论 获得能够表达SARS-CoV-2 RBDEPI的重组痘苗病毒，该疫苗具有免疫原性，为以痘苗病毒为载体的SARS-CoV-2疫苗的进一步研究和临床治疗奠定了基础。
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