目的 克隆、表达细粒棘球绦虫磷酸甘油酸变位酶(EgPGAM),分析其免疫反应性及其在原头节、包囊及成虫中的分布情况,对EgPGAM的诊断价值进行初步评价. 方法 提取细粒棘球蚴原头节RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增EgPGAM基因,测序.通过多种生物信息学软件分析EgPGAM的理化性质、保守结构域、抗原表位和同源性等.利用Mega 5.0软件进行序列特征分析,采用邻接法构建系统进化树.将EgPGAM基因连接至pET32a表达载体,转入大肠埃希菌(E.coli)BL21 (DE3)中进行诱导表达,镍柱纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达情况并进行蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析.免疫荧光定位分析EgPGAM在原头节、包囊及成虫中的分布.采用ELISA评价EgPGAM的诊断价值. 结果 EgPGAM长756 bp,共编码251个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量(Mr)约28 000,等电点为8.29,不含信号肽,无跨膜区.EgPGAM含有12个高保守的氨基酸位点、3个保守的催化活性位点、1个底物结合位点和7个B抗原表位.EgPGAM的氨基酸序列与多房棘球绦虫、猪带绦虫、华支睾吸虫、秀丽隐杆线虫、人和羊的PGAM序列相似性分别为99％、94％、78％、45％、57％和4％.SDS-PAGE分析结果显示,EgPGAM在E.coli BL21 (DE3)中大量表达,主要以可溶形式存在;Western blotting分析结果显示,EgPGAM可与感染细粒棘球蚴的绵羊血清发生反应.免疫荧光定位显示,EgPGAM主要分布在原头节表皮层和顶突沟,包囊生发层和成虫薄壁组织.建立的间接ELISA敏感性为55.6％ (15/27),特异性为86.4％ (89/103). 结论 EgPGAM广泛分布于细粒棘球蚴和细粒棘球绦虫中,具有较好免疫反应性,但敏感性较低,不适合作为细粒棘球蚴病的候选诊断抗原.