【摘 要】
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目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率.方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒.应用病毒包装技术制备c-Met CAR
【机 构】
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南京医科大学病理学系,江苏南京211166;南京医科大学国家卫计委抗体技术重点实验室,江苏南京211166;南京医科大学国家卫计委抗体技术重点实验室,江苏南京,211166;南京医科大学第二附属医院消
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目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率.方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒.应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR (GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞.Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR (GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白.设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较.结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白.c-Met CAR和c-Met CAR (GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白.荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)％、(55.9±2.3)％.流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)％,两种检测方法比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值.
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