【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-124(miR-124)在肾癌细胞自噬和顺铂耐药中可能的作用靶点.方法 以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测34例肾癌组织和癌旁组织,人肾小管上皮细胞HK-2以及4种人肾癌细胞A498、SN12C、RXF393、769P中miR-124表达.以蛋白质印迹法检测用30μg·mL-1顺铂处理对肾癌细胞A498自噬相关蛋白LC3表达的影响.将A498肾癌细胞分为4组:对照组、顺铂组、第1转染组(DMSO+miR-124)、第2转染组(顺铂+miR-124组),在转染组细
【机 构】
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福州市第一医院,泌尿外科,福建 福州350009;福州市第一医院,病理科,福建 福州350009
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目的 探讨微小RNA-124(miR-124)在肾癌细胞自噬和顺铂耐药中可能的作用靶点.方法 以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测34例肾癌组织和癌旁组织,人肾小管上皮细胞HK-2以及4种人肾癌细胞A498、SN12C、RXF393、769P中miR-124表达.以蛋白质印迹法检测用30μg·mL-1顺铂处理对肾癌细胞A498自噬相关蛋白LC3表达的影响.将A498肾癌细胞分为4组:对照组、顺铂组、第1转染组(DMSO+miR-124)、第2转染组(顺铂+miR-124组),在转染组细胞中添加miR-124 mimics.以细胞计数试剂盒8(CCK8)检测过表达miR-124对顺铂半数致死量(IC50)的影响.以荧光素酶报告实验和蛋白质印迹法验证miR-124对组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)的靶向调控作用.结果 肾癌组织和癌旁组织miR-124表达分别为0.48±0.21和1.56±0.46,差异有统计学意义(P<0.05);人肾小管上皮细胞HK-2和人肾癌细胞A498、SN12C、RXF393、769P中miR-124表达分别为1.09±0.23,0.38±0.08,0.46±0.10,0.58±0.09,0.44±0.12,差异有统计学意义(P<0.05).A498细胞用顺铂分别处理0,6,12,24 h,LC3表达分别为1.01±0.03,1.35±0.35,1.68±0.46,2.21±0.53,随着时间的延长,LC3蛋白表达显著增加(P<0.05).第1转染组和第2转染组IC50分别为(7.81±1.14),(22.26±1.14)μg·mL-1,差异有统计学意义(P<0.05).生物信息学网站预测发现HDAC4是miR-124的靶基因,荧光素酶报告实验显示,miR-124过表达可以降低野生型HDAC43\'UTR荧光强度(P0.05).对照组、顺铂组、第1转染组、第2转染组HDAC4蛋白表达分别为0.48±0.08,0.96±0.11,0.22±0.07,0.21±0.08,第1转染组、第2转染组分别与顺铂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 肾癌中miR-124表达降低,顺铂化疗可以诱导肾癌细胞自噬,而过表达miR-124可以降低肾癌细胞自噬,增强顺铂敏感性,其作用的靶标可能为HDAC4.
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