目的 研究雷帕霉素对人骨肉瘤MG-63细胞和骨肉瘤干细胞中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)传导通路的影响,探讨雷帕霉素应用于骨肉瘤联合化疗的可行性.方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞和骨肉瘤干细胞,采用免疫荧光技术检测骨肉瘤细胞球中Nanog和Oct4的表达.以0、20、50和100 nmol/L雷帕霉素处理骨肉瘤干细胞和人骨肉瘤MG-63细胞,采用半定量PCR和定量PCR法检测不同浓度雷帕霉素处理后骨肉瘤干细胞和未经处理的骨肉瘤细胞中mTOR的表达;采用细胞计数盒8(CCK-8)法测定不同浓度雷帕霉素处理后人骨肉瘤MG-63细胞和骨肉瘤干细胞的增殖活性;倒置显微镜下观察不同浓度雷帕霉素处理后骨肉瘤干细胞的形态学变化.结果 荧光显微镜下可见,骨肉瘤MG-63细胞球较致密的核心部分Nanog和Oct4呈阳性表达,提示成球的骨肉瘤细胞球有干细胞特性.半定量PCR检测结果显示,未经雷帕霉素处理的骨肉瘤干细胞中mTOR mRNA的相对表达量为0.761±0.080,明显高于人骨肉瘤MG-63细胞(0.406±0.090,P＜0.05).定量PCR检测结果显示,100 nmol/L雷帕霉素处理组骨肉瘤干细胞中mTOR mRNA的表达量为0.961 ±0.060,明显低于0 nmol/L雷帕霉素处理组(1.654±0.246,P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,与0 nmol/L雷帕霉素处理组比较,20、50和100 nmol/L雷帕霉素处理组人骨肉瘤MG-63细胞的增殖均受到明显抑制(均P ＜0.05);20和50 nmol/L雷帕霉素对骨肉瘤干细胞的增殖无明显的抑制作用(均P＞0.05),但100 nmol/L雷帕霉素对骨肉瘤干细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).形态学观察结果显示,雷帕霉素可以有效抑制骨肉瘤干细胞的成球特性.结论 雷帕霉素通过干预mTOR信号途径可以有效抑制骨肉瘤干细胞的增殖活性和成球特性,这将为雷帕霉素应用于骨肉瘤联合化疗提供理论依据.
雷帕霉素对骨肉瘤干细胞和人骨肉瘤细胞中雷帕霉素靶蛋白传导通路的抑制作用及意义
【摘 要】
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目的 研究雷帕霉素对人骨肉瘤MG-63细胞和骨肉瘤干细胞中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)传导通路的影响,探讨雷帕霉素应用于骨肉瘤联合化疗的可行性.方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞和骨肉瘤干细胞,采用免疫荧光技术检测骨肉瘤细胞球中Nanog和Oct4的表达.以0、20、50和100 nmol/L雷帕霉素处理骨肉瘤干细胞和人骨肉瘤MG-63细胞,采用半定量PCR和定量PCR法检测不同浓度雷帕霉素处理后
【机 构】
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(200025上海市伤骨科研究所上海市中西医结合防治骨与关节病损重点实验室),(上海交通大学医学院附属瑞金医院骨科),(200025上海市伤骨科研究所上海市中西医结合防治骨与关节病损重点实验室),(上
【出 处】
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中华肿瘤杂志
【发表日期】
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2013年35期
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