旋毛虫P49抗原基因克隆体外表达条件的研究

来源 :中国人兽共患病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tjpu0510420215
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旋毛虫肌幼虫排泄一分泌(ES)抗原是用于旋毛虫病免疫检测的理想抗原,包括45kD、49kD和53kD三种主要的特异性蛋白成分.该文利用含有P49抗原基因克隆的重组表达质粒pGEX?p49,电转化大肠杆菌,获得DH5α/pGEX?p49转化子.SDS?PAGE电泳表明,含重组质粒pGEX?p49的大肠杆菌能表达-分子量为61kD的融合蛋白(p49/GST),Western?blot表明该融合蛋白能被鼠旋毛虫病阳性血清特异识别.为提高融合蛋白的表达量,该文对宿主菌诱导条件、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究.“,”The recombinant plasmid pGEX-p49 has been obtained byrecombining the p49 amtigen gene cloned fromTrichinella spiralis and expression vector PGEX-3X. The pGEX-p49 was introduced to E. coli DH5α by electronic transformation. The expression of transformant DH5a/pGEX-p49 was induced by IPTG,and the expression produce was identified by SDS-PAGE electrophoresis and Westernblot. The results showed that the plasmid PGEX-p49 expressed a 61kD fusion protein (p49/GST). Western-blotting showed that the fusion proteinreacted with the antisera raised from mouse against Trichinella spiralis. The influence of the expression condition, such as th-ehosts for pGEX-p49, the period ofinducement, the concentration of inducer and the growthstate of the host when inducement was started,was investigated in order to increase the level of evpression of thefusion protein p49/GET.
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