【摘 要】
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目的:明确活血化瘀方剂是否影响TGF-β/Smad2/3信号通路中TGF-β受体糖基化修饰,用现代医学手段阐明活血化瘀方剂治疗肺间质纤维化的机制。方法:胚胎成纤维细胞WI-38细胞随机
【机 构】
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大连医科大学附属第一医院; 大连医科大学附属大连市中心医院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81273924)~~
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目的:明确活血化瘀方剂是否影响TGF-β/Smad2/3信号通路中TGF-β受体糖基化修饰,用现代医学手段阐明活血化瘀方剂治疗肺间质纤维化的机制。方法:胚胎成纤维细胞WI-38细胞随机分为3组,①正常组为单独的DMEM培养;②TGF组加入浓度为10ng/mL的TGF-β1孵育48h;③TGFH组先用10%含活血化瘀方剂血清孵育24h,然后加入10ng/mL TGF-β1继续孵育48h。应用荧光定量PCR、免疫荧光、免疫印记技术检测各组WI-38细胞的FUT8、细胞的岩藻糖基化水平,TGF-β受体ALK5及TGF-βRⅡ的表达,应用ELISIA技术检测细胞培养液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维(COLⅠ、Ⅲ、Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的变化。结果:活血化瘀方剂能明显地抑制WI-38细胞的FUT8的表达和细胞的岩藻糖基化水平,活血化瘀方剂对TGF-β受体ALK5及TGF-βRⅡ的表达无明显影响,但可以减少TGF-β1对WI-38细胞p-Smad2/3的影响,使其表达降低。COLⅠ在TGF组中表达约为正常组的1.5倍,COLⅢ在TGF组中表达约为正常组的2.5倍,COLⅣ在TGF组中表达约为正常组的1倍,FN在TGF组中表达约为正常组的2.5倍,TGFH组COLⅠ、Ⅲ、Ⅳ及FN表达略高于正常组,与TGF组间具有统计学差异。结论:活血化瘀方剂可以抑制TGF-β诱导后肺成纤维细胞ALK5/TGF-βRⅡ-Smad2/3信号通路的糖基化修饰,减少Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维和FN的表达。
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