【摘 要】
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[目的] 建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查.[方法] 用查菲埃立克体分离株(91HE17)感染犬巨噬细胞(DH82细胞)
【机 构】
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福建省流行病防治研究所,福州,350001;福建省武警边防总队海警一支队卫生所
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[目的] 建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查.[方法] 用查菲埃立克体分离株(91HE17)感染犬巨噬细胞(DH82细胞),感染40天后收集DH82细胞.根据查菲埃立克体16S rRNA基因序列设计引物,特异性扩增查菲埃立克体DNA.运用限制性片段长度多态性分析对PCR扩增产物进行鉴定.[结果] 扩增产物经过1.5%琼脂糖凝胶电泳和5%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分析,并用PGEM-3Z(+)/HaeⅢ DNA Marker作为核酸分子量参照物,证实扩增产物是查菲埃立克体16S rRNA基因序列的389 bp核酸片段.将扩增产物用HaeⅢ消化后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析.产生预期338 bp和51 bp酶切片段.[结论] 引物HE1和HE3具有高度特异性.PCR反应是具有高度敏感性和特异性,可作为对人类埃立克体病疫源地、传播媒介及储存宿主进行调查的有效方法.
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