【摘 要】
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目的 探讨橘红素（tangeretin, Tan）通过腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP activated proteinkinase, AMPK）/沉默信息调节因子2相关酶3（silent information regulator factor 2related enzyme 3,SIRT3）信号轴对人胃癌AGS细胞自噬的影响及机制。方法 用不同浓度(5、10、30、60、120μmol·L-1)
【基金项目】
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河北省2021年医学科学研究项目（编号：20210941）；
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目的 探讨橘红素（tangeretin, Tan）通过腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP activated proteinkinase, AMPK）/沉默信息调节因子2相关酶3（silent information regulator factor 2related enzyme 3,SIRT3）信号轴对人胃癌AGS细胞自噬的影响及机制。方法 用不同浓度(5、10、30、60、120μmol·L-1)Tan分别作用于AGS细胞24、48、72 h,用MTT法检测Tan对细胞的抑制作用，计算半抑制浓度(50%inhibitory concentration, IC50),观察细胞形态变化情况；将细胞随机分为对照组、Tan组、激动剂组，其中Tan组、激动剂组分别用IC50的Tan、AMPK激动剂A-769662处理细胞，对照组不做处理，培养48 h后，用透射电镜观察自噬泡，用MDC染色法观察细胞自噬情况，用qRT-PCR法检测AMPK以及SIRT3基因诱导量的变化，用Western blot检测细胞中相关蛋白AMPK、p-AMPK、SIRT3、LC3II、p62的表达水平。结果 培养24、48、72 h后，AGS细胞对Tan的IC50值分别为（46.42±5.62）、（59.76±7.01）、（83.56±8.86）μmol·L-1,不同浓度的Tan作用于细胞，细胞形态发生改变，随着Tan浓度的升高，细胞形态变化程度加剧；透射电镜下对照组有少量自噬泡形成，Tan组无自噬泡形成，激动剂组有大量自噬泡形成；MDC染色结果显示，与对照组比较，Tan组的荧光强度较弱，激动剂组的荧光强度较强；与对照组比较，Tan组SIRT3 mRNA的相对表达量降低，激动剂组SIRT3 mRNA的相对表达量升高（P＜0.05）。与Tan组比较，激动剂组SIRT3 mRNA的相对表达量升高（P＜0.05）。与对照组比较，Tan组细胞中p-AMPK、SIRT3、LC3II蛋白的相对表达量降低，p62蛋白的相对表达量升高，激动剂组p-AMPK、SIRT3、LC3II蛋白的相对表达量升高，p62蛋白的相对表达量降低（P＜0.05）。与Tan组比较，激动剂组细胞中p-AMPK、SIRT3、LC3II蛋白的相对表达量升高，p62蛋白的相对表达量降低（P＜0.05）。各组细胞中AMPK mRNA和蛋白的相对表达量比较，差异无统计学意义。结论 Tan可抑制人胃癌AGS细胞发生自噬，可能是通过调控AMPK/SIRT3信号通路发挥作用。
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