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摘要：探讨髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）在新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemic ence- phalopathy，HIE）患儿和正常新生儿血浆中表达变化及其临床意义。方法：收集40例正常新生儿和40例HIE患儿血液标本，分离血清，ELISA方法检测血清中MPO含量。由受过专业培训的新生儿医师对其行NBNA 评分。
结果：与正常对照组相比，HIE患儿血浆中MPO水平显著升高（P <0.01）。而MPO水平与NBNA评分呈显著负相关，相关系数为（r = -0.811，P < 0.01）。結论：HIE患儿血浆MPO水平显著升高，且均与NBNA评分呈显著负相关。
关键词：新生儿缺氧缺血脑病；髓过氧化物酶；NBNA
Absrtact To explore the expression and correlation of MPO and NBNA in hypoxic-ischemic encephalopathy（HIE）neonatus.Methods：40 controls and 40 HIE samples were recruited in this study，serum was prepared for detecting MPO dose by ELISA.By a specially trained physician to its line of newborn NBNA score.Result：Comparing with controls，MPO concentration in plasma was significantly increased（P <0.01）.Furthermore，MPO and NBNA score showed a significant negative correlation respectively（r = -0.811，P < 0.01）Conclusion：MPO significantly increased and showed significantly negatively relationship with NBNA score in HIE.
Key words：Hypoxic-ischemic encephalopathy；MPO；NBNA
新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）指各种原因引起的缺氧和脑血流量减少导致的新生儿脑损伤，是新生儿死亡和慢性神经系统后遗症如癫痫、智力迟钝和大脑性麻痹重要原因之一[1-2]。近几年来大量研究结果表明炎症反应在缺氧缺血性脑损伤中起重要作用。
髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一[3]。MPO的相对分子质量为150×10^3，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链（α链，相对分子质量约60×10^3）和一条轻链（β链，相对分子质量约15×10^3）所构成。研究表明MPO可催化反应生成过量的氧化剂（HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等），导致氧化应激和氧化性组织损伤，介导炎症反应，释放多种炎症介质，参与多种缺血缺氧疾病的发生发展，如冠心病，缺血性脑卒中，缺血缺氧性脑病等[4]。最新研究表明，血浆中MPO水平是预测急性冠脉综合征及缺血性脑卒中临床预后的重要指标之一，因此我们拟观察HIE患儿血浆中MPO水平变化，并探讨其与NBNA 评分的相关性，为阐明MPO在HIE早期诊断与危险评估中的重要意义提供理论依据。
1 材料与方法
1.1病例选择
本研究样本来自2010年1月至2012年12月湖南省妇幼保健院新生儿病房收治的足月新生儿，参考2004年长沙制定的新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准[5]，将新生儿分成两组，第一组为正常对照组40例（胎龄39.5±2.1，男22例，女18例），第二组为HIE组40例（胎龄39.2±2.6，男20例，女20例。有严重感染性疾病、中枢神经系统畸形、先天性心脏病的患儿排除在外。
1.2 MPO检测方法
对入选的新生儿在出生后24h时抽取股静脉血3ml于EDTA抗凝管中，4°C，3000rpm离心10min，取血清分装于EP管中，- 20°C 冰箱保存，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清MPO浓度。试剂盒购自美国santa cruz公司，严格按照试剂盒说明书的步骤进行操作，通过标准曲线计算出MPO浓度。
1.3 NBNA 评分方法
所有入选病例均于取血前由受过专门培训的医生采用鲍秀兰等制定的20
项NBNA 测定方法[6]进行测评。NBNA 测定在安静、半暗、温暖（室温为22℃～27℃）的房间内，一般在喂奶后1 小时睡眠状态下进行。内容共分5个部分，包括行为能力6 项，被动肌张力4 项，主动肌张力4 项，原始反射3 项，评分有3个分度（0 分、1 分、2 分），满分为40 分。正常新生儿NBNA 基本项目评分应在37 分及以上，低于35 分提示有脑损伤，35-36 分之间脑损伤可疑。
1.4 统计分析
所有的数据均以均数±标准差（ ±s）表示，统计分析采用SPSS13.0软件包。两组数据间的比较采用独立样本t检验，相关性检验采用Spearman 相关分析，P <0.05 为差异有统计学意义。
2、结果
2.1 HIE组与正常对照组临床资料比较
如表1所示：HIE 组与对照组在胎龄、出生体重、性别、日龄上比较，差异无统计学意义。 2.3 HIE患儿血清MPO与NBNA评分相关性分析
如图1及图2所示，采用Spearman 相关分析发现HIE患儿血清MPO浓度与患者的NBNA评分呈显著负相关（r = -0.811，P < 0.01）。
讨论：
HIE在围产期神经系统疾病中占有重要位置，是新生儿死亡和慢性神经系统后遗症如癫痫、智力迟钝和大脑性麻痹重要原因之一。NBNA评分是被普遍接受的新生儿行为神经检查评价方法，目前已在临床中广泛使用。本研究通过观察HIE血清中MPO含量变化，结合NBNA评分，初步探讨MPO在HIE早期诊断与危险评估中的重要意义。我们发现：1）HIE患儿血浆中MPO含量明显升高，而NBNA评分明显降低；2）HIE患儿血浆中MPO水平与NBNA评分呈显著负相关。
HIE患儿脑部缺氧缺血时，其神经行为先于神经系统器质性改变而发生变化。NBNA 评分是一套广泛开展并被普遍接受的新生儿神经行为检查评价方法。可早發现、早诊断、早治疗脑损伤的高危儿，从而有效降低因缺氧缺血所致的脑瘫、智力低下等神经系统损伤后遗症的发生。NBNA 检测新生儿脑损伤敏感性高，特异性强，测查工具经济，评分方法简单，测查时间节省，且为无创检查，故是评价HIE患者神经行为的重要手段之一。研究表明，患儿的脑损害越严重，NBNA 评分越低，两者呈显著负相关[7-8]。在本研究中我们也发现：与对照组比较，轻度、中度和重度HIE 组NBNA评分显著降低；HIE严重程度越重，NBNA 评分越低，二者成显著负相关。
髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一，是中性粒细胞的功能标志和激活标志，其水平及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞（PMN）的功能和活性状态。最初研究发现MPO的功能是依靠MPO–H2O2–卤素系统，利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐，在吞噬细胞内杀灭微生物。随着研究的深入，许多研究发现，MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，而且可释放到细胞外，参与调节炎症反应[9]。研究证实，MPO可促进动脉粥样硬化形成，MPO水平的升高不仅与患冠心病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性，因此MPO是预测冠心病患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子[10]。我们的研究证实，在HIE患儿血浆中MPO含量明显升高，且与严重程度呈正相关，与NBNA评分呈显著负相关，提示HIE患儿血浆MPO水平可能是评价HIE严重程度的有效指标之一。
总之，HIE的发病机制复杂，临床靠单一的检测指标来诊断本病是不科学的，临床医师应将患儿的临床表现与客观检查指标相结合，更利于HIE早期诊断与治疗。本研究通过观察HIE血浆中MPO含量，并结合NBNA评分发现HIE患儿严重程度越重，NBNA评分越低，MPO含量越高，且MPO与NBNA评分呈显著负相关。提示MPO可能是HIE早期诊断的有效指标。但本研究样本量偏小，有待大规模临床研究进一步证实。
参考文献：
[1]Yin XJ，Wei W，Han T，et al.Value of amplitude-integrated electroencephalograph in early diagnosis and prognosis prediction of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy[J].Int J Clin Exp Med，2014，7（4）：1099-1104.
[2]13辛颖，韩玉琵，高红等。碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤防治作用及其机制探讨。中华儿科杂志，2001，39（4）：223～226.
[3]Anatoliotakis N，Deftereos S，Bouras G，Giannopoulos G，Tsounis D，Angelidis C，Kaoukis A，Stefanadis C.Myeloperoxidase：expressing inflammation and oxidative stress in cardiovascular disease.Curr Top Med Chem.2013；13（2）：115-38.
[4]Ho E，Karimi Galougahi K，Liu CC，Bhindi R，Figtree GA.Biological markers of oxidative stress：Applications to cardiovascular research and practice.Redox Biol.2013 Oct 8；1（1）：483-91.
[5]中华医学会儿科分会新生儿学组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准.中国当代儿科杂志，2005，7（2）：97-9
[6]鲍秀兰.新生儿行为和0～3岁教育.北京：中国少年儿童出版社，1995：1～10.
[7]中华医学会儿科学分会新生儿学组，新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准[J].中国当代儿科杂志，2005，7（2）：97-98.
[8]崔兴杰，张雅慧.宫内缺氧对新生儿神经行为的影响[J].河南实用神经疾病杂杂志，2003，6（4）：64.
结果：与正常对照组相比，HIE患儿血浆中MPO水平显著升高（P <0.01）。而MPO水平与NBNA评分呈显著负相关，相关系数为（r = -0.811，P < 0.01）。結论：HIE患儿血浆MPO水平显著升高，且均与NBNA评分呈显著负相关。
关键词：新生儿缺氧缺血脑病；髓过氧化物酶；NBNA
Absrtact To explore the expression and correlation of MPO and NBNA in hypoxic-ischemic encephalopathy（HIE）neonatus.Methods：40 controls and 40 HIE samples were recruited in this study，serum was prepared for detecting MPO dose by ELISA.By a specially trained physician to its line of newborn NBNA score.Result：Comparing with controls，MPO concentration in plasma was significantly increased（P <0.01）.Furthermore，MPO and NBNA score showed a significant negative correlation respectively（r = -0.811，P < 0.01）Conclusion：MPO significantly increased and showed significantly negatively relationship with NBNA score in HIE.
Key words：Hypoxic-ischemic encephalopathy；MPO；NBNA
新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）指各种原因引起的缺氧和脑血流量减少导致的新生儿脑损伤，是新生儿死亡和慢性神经系统后遗症如癫痫、智力迟钝和大脑性麻痹重要原因之一[1-2]。近几年来大量研究结果表明炎症反应在缺氧缺血性脑损伤中起重要作用。
髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一[3]。MPO的相对分子质量为150×10^3，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链（α链，相对分子质量约60×10^3）和一条轻链（β链，相对分子质量约15×10^3）所构成。研究表明MPO可催化反应生成过量的氧化剂（HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等），导致氧化应激和氧化性组织损伤，介导炎症反应，释放多种炎症介质，参与多种缺血缺氧疾病的发生发展，如冠心病，缺血性脑卒中，缺血缺氧性脑病等[4]。最新研究表明，血浆中MPO水平是预测急性冠脉综合征及缺血性脑卒中临床预后的重要指标之一，因此我们拟观察HIE患儿血浆中MPO水平变化，并探讨其与NBNA 评分的相关性，为阐明MPO在HIE早期诊断与危险评估中的重要意义提供理论依据。
1 材料与方法
1.1病例选择
本研究样本来自2010年1月至2012年12月湖南省妇幼保健院新生儿病房收治的足月新生儿，参考2004年长沙制定的新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准[5]，将新生儿分成两组，第一组为正常对照组40例（胎龄39.5±2.1，男22例，女18例），第二组为HIE组40例（胎龄39.2±2.6，男20例，女20例。有严重感染性疾病、中枢神经系统畸形、先天性心脏病的患儿排除在外。
1.2 MPO检测方法
对入选的新生儿在出生后24h时抽取股静脉血3ml于EDTA抗凝管中，4°C，3000rpm离心10min，取血清分装于EP管中，- 20°C 冰箱保存，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清MPO浓度。试剂盒购自美国santa cruz公司，严格按照试剂盒说明书的步骤进行操作，通过标准曲线计算出MPO浓度。
1.3 NBNA 评分方法
所有入选病例均于取血前由受过专门培训的医生采用鲍秀兰等制定的20
项NBNA 测定方法[6]进行测评。NBNA 测定在安静、半暗、温暖（室温为22℃～27℃）的房间内，一般在喂奶后1 小时睡眠状态下进行。内容共分5个部分，包括行为能力6 项，被动肌张力4 项，主动肌张力4 项，原始反射3 项，评分有3个分度（0 分、1 分、2 分），满分为40 分。正常新生儿NBNA 基本项目评分应在37 分及以上，低于35 分提示有脑损伤，35-36 分之间脑损伤可疑。
1.4 统计分析
所有的数据均以均数±标准差（ ±s）表示，统计分析采用SPSS13.0软件包。两组数据间的比较采用独立样本t检验，相关性检验采用Spearman 相关分析，P <0.05 为差异有统计学意义。
2、结果
2.1 HIE组与正常对照组临床资料比较
如表1所示：HIE 组与对照组在胎龄、出生体重、性别、日龄上比较，差异无统计学意义。 2.3 HIE患儿血清MPO与NBNA评分相关性分析
如图1及图2所示，采用Spearman 相关分析发现HIE患儿血清MPO浓度与患者的NBNA评分呈显著负相关（r = -0.811，P < 0.01）。
讨论：
HIE在围产期神经系统疾病中占有重要位置，是新生儿死亡和慢性神经系统后遗症如癫痫、智力迟钝和大脑性麻痹重要原因之一。NBNA评分是被普遍接受的新生儿行为神经检查评价方法，目前已在临床中广泛使用。本研究通过观察HIE血清中MPO含量变化，结合NBNA评分，初步探讨MPO在HIE早期诊断与危险评估中的重要意义。我们发现：1）HIE患儿血浆中MPO含量明显升高，而NBNA评分明显降低；2）HIE患儿血浆中MPO水平与NBNA评分呈显著负相关。
HIE患儿脑部缺氧缺血时，其神经行为先于神经系统器质性改变而发生变化。NBNA 评分是一套广泛开展并被普遍接受的新生儿神经行为检查评价方法。可早發现、早诊断、早治疗脑损伤的高危儿，从而有效降低因缺氧缺血所致的脑瘫、智力低下等神经系统损伤后遗症的发生。NBNA 检测新生儿脑损伤敏感性高，特异性强，测查工具经济，评分方法简单，测查时间节省，且为无创检查，故是评价HIE患者神经行为的重要手段之一。研究表明，患儿的脑损害越严重，NBNA 评分越低，两者呈显著负相关[7-8]。在本研究中我们也发现：与对照组比较，轻度、中度和重度HIE 组NBNA评分显著降低；HIE严重程度越重，NBNA 评分越低，二者成显著负相关。
髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一，是中性粒细胞的功能标志和激活标志，其水平及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞（PMN）的功能和活性状态。最初研究发现MPO的功能是依靠MPO–H2O2–卤素系统，利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐，在吞噬细胞内杀灭微生物。随着研究的深入，许多研究发现，MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，而且可释放到细胞外，参与调节炎症反应[9]。研究证实，MPO可促进动脉粥样硬化形成，MPO水平的升高不仅与患冠心病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性，因此MPO是预测冠心病患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子[10]。我们的研究证实，在HIE患儿血浆中MPO含量明显升高，且与严重程度呈正相关，与NBNA评分呈显著负相关，提示HIE患儿血浆MPO水平可能是评价HIE严重程度的有效指标之一。
总之，HIE的发病机制复杂，临床靠单一的检测指标来诊断本病是不科学的，临床医师应将患儿的临床表现与客观检查指标相结合，更利于HIE早期诊断与治疗。本研究通过观察HIE血浆中MPO含量，并结合NBNA评分发现HIE患儿严重程度越重，NBNA评分越低，MPO含量越高，且MPO与NBNA评分呈显著负相关。提示MPO可能是HIE早期诊断的有效指标。但本研究样本量偏小，有待大规模临床研究进一步证实。
参考文献：
[1]Yin XJ，Wei W，Han T，et al.Value of amplitude-integrated electroencephalograph in early diagnosis and prognosis prediction of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy[J].Int J Clin Exp Med，2014，7（4）：1099-1104.
[2]13辛颖，韩玉琵，高红等。碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤防治作用及其机制探讨。中华儿科杂志，2001，39（4）：223～226.
[3]Anatoliotakis N，Deftereos S，Bouras G，Giannopoulos G，Tsounis D，Angelidis C，Kaoukis A，Stefanadis C.Myeloperoxidase：expressing inflammation and oxidative stress in cardiovascular disease.Curr Top Med Chem.2013；13（2）：115-38.
[4]Ho E，Karimi Galougahi K，Liu CC，Bhindi R，Figtree GA.Biological markers of oxidative stress：Applications to cardiovascular research and practice.Redox Biol.2013 Oct 8；1（1）：483-91.
[5]中华医学会儿科分会新生儿学组.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准.中国当代儿科杂志，2005，7（2）：97-9
[6]鲍秀兰.新生儿行为和0～3岁教育.北京：中国少年儿童出版社，1995：1～10.
[7]中华医学会儿科学分会新生儿学组，新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准[J].中国当代儿科杂志，2005，7（2）：97-98.
[8]崔兴杰，张雅慧.宫内缺氧对新生儿神经行为的影响[J].河南实用神经疾病杂杂志，2003，6（4）：64.